Наборы для очистки белков

Набор для экстракции бактериального белка B-PER обеспечивает мягкую экстракцию белков из бактерий (E. coli) без необходимости механического повреждения клеток. Набор может быть использован для выделения растворенных белков и телец включения из бактериальных клеточных лизатов. В состав набора входит реагент для экстракции бактериального белка B-PER, лизоцим и ДНКаза I, что позволяет выделять белки большого молекулярного веса (более 70 кДа) и белки экспрессирующиеся в тельцах включения. В зависимости от применения, добавочные компоненты: ингибиторы протеаз, соли, восстанавливающие агенты могут быть добавлены к реагенту.

Важная информация о продукте:

• B-PER экстрагирует белки из свежих и замороженных клеток. Обычно экстракция более эффективна из замороженных клеток. Количество реагента зависит от количества клеточной пасты. Если необходимо, добавьте ингибиторы протеаз не содержащие ЭДТА, соли, и восстанавливающие агенты прямо в реагент.
• добавьте лизоцим и ДНКазу I к B-PER реагенту для более эффективной экстракции белка. Экстракция некоторых сверхэкспрессированных белков не требует добавления лизоцима;
• если добавление лизоцима и ДНКазы I может помешать последующему применению, использование этих ферментов следует исключить;
• реагент B-PER эффективно экстрагирует растворимые белки из распространенных бактериальных штаммов и особенно подходит для штаммов BL21 с дефектной протеазной экспрессией. Если лизис клеток проходит неэффективно для определенного бактериального штамма, заморозьте клетки перед экстракцией;
• лизаты цельных клеток, приготовленные с помощью реагента B-PER, совместимы с последующими приложениями, такими как количественное определение белка методом BCA или методом Брэдфорда.

Протокол экстракции белка из бактериальных клеток:

• осадите бактериальные клетки центрифугированием при 5000 g в течении 10 минут;
• если необходимо, добавьте 2 мкл лизоцима и 2 мкл ДНКазы I на 1 мл реагента B-PER. Добавьте ингибитор протеаз не содержащий ЭДТА;
• добавьте 4 мл реагента B-PER на каждый грамм осадка клеток. Суспендируйте пипетированием;
• инкубируйте 10-15 минут при комнатной температуре;
• центрифугируйте лизат при 15000 g в течении 5 минут для отделения растворимых и нерастворимых белков.

Примечание: Если огромное количество сверхэкспрессированного белка остается в осадке, выделяемый белок может экспрессироваться в тельцах включения. В этом случае, либо используйте реагент для очистки телец включений (арт. 78115), либо измените условия экспрессии белка для минимизации образования телец включения.

Проблемы при выделении, причины и решения:

Проблема	Возможная причина	Решение
Выделяемый белок не растворяется	Выделяемый белок экспрессируется в тельцах включения	Измените условия экспрессии белка или используйте реагент для солюбилизации телец включения.
		Добавьте лизоцим и ДНКазу I к реагенту B-PER
Бактериальные клетки не лизируются при добавлении фермента	Температура слишком низкая	Подогрейте клеточную культуру и остальные реагенты до комнатной температуры
	Лизоцим имеет низкую активность или неактивен	Добавьте больше лизоцима к B-PER реагенту или купите новый фермент.
Высокая вязкость клеточного экстракта	ДНКаза I имеет низкую активность или неактивна	Добавьте больше ДНКазы I к B-PER реагенту или купите новый фермент.
		Добавьте Mg2+ до конечной концентрации 2 mM
Сверхэкспрессированный белок остается в осадке	Только реагент B-PER не может перевести белок в растворенное состояние	Добавьте лизоцим и ДНКазу I к B-PER
Реагент B-PER мутный после доставки	Реагент холодный	Нагрейте реагент до комнатной температуры

Состав набора B-PER:

• B-PER реагент для экстракции бактериального белка, 250 мл;
• лизоцим, 0.5 мл 50мг/мл;
• ДНКаза I, 0.5 мл, 2500 ед/мл.

Сопутствующие товары Thermo Scientific:

• 78990 Реагент для экстракции белка из дрожжей Y-PER, Thermo FS;
• 89802 Реагент для экстракции белка из клеток насекомых I-PER, Thermo FS;
• 78505 Реагент для экстракции белка из культивируемых клеток млекопитающих M-PER, Thermo FS;
• 78510 Реагент для экстракции белка из тканей T-PER, Thermo FS;
• A44056 Реагент для экстракции суммарного белка из растений Pierce Plant, Thermo FS;
• 89802 Реагент для экстракции белка из насекомых I-PER, Thermo FS;
• 78115 Реагент для очистки телец включений, Thermo FS.

Информацию о данной продукции можно получить по запросу.

Набор для экстракции бактериального белка, НЭББ — готовый к использованию реагент для лизиса клеток, представляющий собой раствор на основе неионогенных детергентов, которые эффективно разрушают клетки и солюбилизируют нативные или рекомбинантные белки без денатурации. Все реагенты НЭББ совместимы с последующими приложениями, такими как ионообменная и аффинная хроматография (например, аффинная хроматография с иммобилизованным металлом, хроматография с глутатионом), SDS-электрофорез, количественное определение белка методом BCA или методом Брэдфорда. В зависимости от конкретного применения, к реагенту могут быть добавлены ингибиторы протеаз, соли, восстанавливающие агенты, денатурирующие агенты и хелатирующие агенты кроме ЭДТА.

НЭББ более эффективен, чем традиционная обработка ультразвуком и приготовленные в лаборатории буферы для лизиса, многие, из которых содержат детергенты и компоненты, которые мешают последующим применениям.

• Готов к использованию — одностадийный лизис клеток грамотрицательных бактерий с использованием мягкого неионогенного детергента в составе буфера.
• Удобен в использовании — добавьте реагент в бактериальный осадок, инкубируйте при перемешивании в течение 10–15 минут и извлеките растворимые белки после осаждения остатков клеток.
• Обеспечивает высокий выход рекомбинантных белков из бактериальных лизатов или очистку телец включения до почти гомогенного состояния.
• Подходит для любого масштаба экстракции белка и доступен в нескольких форматах.
• Совместим с добавлением ингибиторов протеаз.

Наборы для экстракции бактериального белка:

• 123456.0010 НЭББ-10 (на 10 г биомассы бактерий):
  • 20хНЭББ-буфер 50 мл;
  • лизоцим, 0,2 мл, 50 мг/мл;
  • бензонуклеаза, 0,2 мл, 10000 ед/мл.
• 123456.0025 НЭББ-25 (на 25 г биомассы бактерий):
  • 20хНЭББ-буфер 100 мл;
  • лизоцим, 0,5 мл, 50 мг/мл;
  • бензонуклеаза, 0,5 мл, 10000 ед/мл.
• 123456.0100 НЭББ-100 (на 100 г биомассы бактерий);
  • 20хНЭББ-буфер 500 мл;
  • лизоцим, 4×0,5 мл, 50 мг/мл;
  • бензонуклеаза, 4×0,5 мл, 10000 ед/мл;

Условия хранения:
20хбуфер — при комнатной температуре или при +4 °С.
Лизоцим и бензонуклеаза при -20 °С.

Набор для экстракции бактериального белка (НЭББ), инструкция по применению, Диаэм, русск., 2 стр.