Набор реактивов для обратной транкрипции с MMLV–RH представляет собой полную систему для эффективного синтеза первой цепи кДНК с использованием в качестве матрицы мРНК или суммарной РНК. Набор содержит все необходимые компоненты для проведения обратной транскрипции: обратную транскриптазу MMLV–RH, два варианта 5× ОТ-буфера, смесь dNTP, раствор ДТТ, растворы олиго(dT)₁₆ праймера и случайного гексапраймера, а также свободную от РНКаз воду.

MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.

Кроме обратной транскриптазы, набор содержит два типа буфера на основе KCl и (NH₄)₂SO₄, оптимизированные для проведения эффективной реакции обратной транскрипции с любых матриц РНК, в том числе содержащих участки повышенной сложности (сильно структурированные или GC-богатые).

Олиго(dT)₁₆ праймер и случайный гексапраймер позволяют более узконаправленно подходить к обратной транскрипции интересующих типов или участков РНК. Случайный гексапраймер неспецифически связывается с РНК-матрицей и используется для синтеза кДНК со всех типов РНК в составе суммарной РНК. Олиго(dT)₁₆ праймер селективно отжигается на полиадениновых последовательностях РНК, обеспечивая синтез кДНК только с мРНК, содержащих поли(А)-3’-конец. Также можно использовать специфичные праймеры для синтеза определённой последовательности.

Состав набора

Компонент	Кат. #
Компонент	1967.0050	1959.0250
MMLV-RH ревертаза, 100 ед. акт./ мкл*	1 × 50 мкл (5000 ед.акт.)	2 × 250 мкл (25000 ед.акт.)
5× ОТ-буфер (KCl)	1 × 220 мкл	3 × 400 мкл
5× ОТ-буфер ((NH₄)₂SO₄)	1 × 220 мкл	3 × 400 мкл
20× смесь dNTP (10 мМ каждого)	1 × 120 мкл	2 × 300 мкл
Дитиотреитол	1 × 110 мкл	2 × 260 мкл
Случайный гексапраймер, 20 мкМ	1 × 50 мкл	1 × 260 мкл
Олиго(dT) праймер, 20 мкМ	1 × 50 мкл	1 × 260 мкл
Вода, обработанная ДЭПК	3 × 600 мкл	5 × 1.8 мл

* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 1 нмоль dTMP в кислотонерастворимый продукт за 10 мин при +37 °С.

Источник
Фермент получен из рекомбинантного штамма Е. coli, содержащего делеционный вариант гена обратной транскриптазы MMLV.

Буфер для хранения:
50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при +25°C), 100 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 5 мМ дитиотреитол, 50 % (v/v) глицерин и 0.1 % (v/v) NP-40.

5× ОТ-буфер (KCl):
250 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при +25°C), 250 мM KCl, 20 мМ MgCl₂, стабилизаторы.

5× ОТ-буфер ((NH₄)₂SO₄):
250 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при +25°C), 100 мM (NH₄)₂SO₄, 20 мМ MgCl₂, стабилизаторы.

Область применения:

Синтез первой цепи кДНК для ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в режиме реального времени.
Синтез кДНК для клонирования.
Получение меченых кДНК-зондов для микрочипов (microarray).
Мечение ДНК.
Анализ РНК с помощью праймер-экстеншн.

Хранение и транспортировка:
при -20°С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

1967_Набор реактивов для обратной транскрипции с MMLV, инструкция, Диаэм, русск., стр. 3

Диаэм

Экстра-микс для обратной транскрипции и ПЦР в режиме реального времени одношаговым методом RT-qPCR SYBR Blue

1970.0080

80 реакций

9 208, руб.

9 208, руб. RUB

1970.0400

400 реакций

41 777, руб.

41 777, руб. RUB

Экстра-микс RT-qPCR SYBR Blue предназначен для проведения обратной транскрипции и количественной ПЦР в режиме реального времени одношаговым методом с использованием флуоресцентного красителя SYBR Green I. Кроме собственно экстра-микса RT-qPCR, в состав набора входят 2-кратный буфер RT-qPCR SYBR Blue и вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК). Буфер оптимизирован для протекания как обратной транскрипции, так и ПЦР (в том числе на сложных и GC-богатых матрицах) и содержит все необходимые компоненты (за исключением РНК-матрицы и праймеров), а также интеркалирующий краситель SYBR Green I. Хранение буфера при комнатной температуре в течение 2 дней не снижает эффективность реакции. Инертный краситель в составе Экстра-микса окрашивает его в голубой цвет (максимум поглощения – 615 нм) и облегчает контроль за раскапыванием смеси при использовании многолуночных планшетов.

Экстра-микс RT-qPCR представляет собой смесь обратной транскриптазы MMLV-RH и HS-Taq ДНК-полимеразы с "горячим" стартом в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций.

MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре ниже +70^оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95°С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; обладает способностью присоединять аденин к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

SYBR Green I - флуоресцентный интеркалирующий краситель для количественной и качественной детекции продуктов в ходе ПЦР в режиме реального времени. SYBR Green I обеспечивает простой и экономичный вариант для детекции и количественного определения ПЦР-продуктов без необходимости использования специфичных флуоресцентных зондов (в том числе в режиме реального времени). В ходе амплификации краситель SYBR Green I встраивается в малую бороздку ДНК ПЦР-продуктов и испускает более сильный по сравнению с несвязанным красителем флуоресцентный сигнал. Максимумы поглощения и испускания SYBR Green I - 494 нм и 521 нм соответственно, что позволяет использовать его со всеми известными на сегодняшний день амплификаторами для проведения ПЦР в режиме реального времени.

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	Экстра-микс RT-qPCR	Буфер RT-qPCR SYBR Blue(2x)	ДМСО	Вода, обработанная ДЭПК
1969.0040	40	80 мкл	2 х 0,5 мл	0,5 мл	2 х 0,5 мл
1969.0200	200	2 х 200 мкл	4 х 1,25 мл	0,5 мл	3 х 1,8 мл

Состав Экстра-микса RT-qPCR:

50 мM Трис-НCl, рН 8.0 (при +25 °С);
100 мM NaCl;
MMLV-RH обратная транскриптаза;
HS-Taq ДНК-полимераза;
1 мМ ЭДТА;
5 мМ дитиотреитол;
50% (v/v) глицерин;
0,1% (v/v) NP-40.

Состав буфера RT-qPCR SYBR Blue (2х):

100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при +25 °С);
150 мM КCl;
0,6 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
10 мМ MgCl₂;
8 мМ дитиотреитол;
интеркалирующий краситель SYBR Green I;
инертный краситель;
стабилизаторы и усилители активности ферментов.

Преимущества использования экстра-микса:

Высокая специфичность.
Высокая чувствительность.
Простота и удобство в использовании.
Низкая ошибка пипетирования и вероятности кросс-контаминации.
Стандартизация условий постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
Возможность ТА-клонирования ПЦР-продуктов.

Область применения:

Одношаговая стандартная ОТ-ПЦР.
Количественный анализ РНК, в том числе анализ экспрессии генов.

Ограничения к использованию:

Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.
Не рекомендуется использовать для ПЦР с флуоресцентными зондами.

Срок хранения и транспортировка:
9 месяцев при -20 °С; не более 30 циклов замораживания- азмораживания экстра-микса RT-qPCR.

Диаэм

Экстра-микс для обратной транскрипции и ПЦР одношаговым методом RT-PCR-Color

1971.0040

40 реакций

транспортировка -20°C

7 673, руб.

7 673, руб. RUB

1971.0200

200 реакций

34 530, руб.

34 530, руб. RUB

Экстра-микс RT-PCR Color предназначен для проведения обратной транскрипции и ПЦР одношаговым методом. Кроме собственно экстра-микса, в состав набора входят 2-кратный буфер RT-PCR Color, ДМСО и вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК). Буфер оптимизирован для протекания как обратной транскрипции, так и ПЦР и содержит все необходимые компоненты (за исключением РНК-матрицы и праймеров). Хранение буфера при комнатной температуре в течение 2 дней не снижает эффективность реакции. Буфер содержит красители, не влияющие на работу ферментов, и компоненты, увеличивающие плотность пробы для удобства нанесения на гель.

Экстра-микс RT-PCR Color представляет собой смесь обратной транскриптазы MMLV-RH и HS-Taq ДНК-полимеразы с "горячим" стартом в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций.

MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре ниже +70^оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95°С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; обладает способностью присоединять аденин к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	Экстра-микс RT-PCR Color	Буфер RT-PCR Color (2x)	ДМСО	Вода, обработанная ДЭПК
1971.0040	40	80 мкл	2 х 0,5 мл	0,5 мл	2 х 0,5 мл
1971.0200	200	2 х 200 мкл	4 х 1,25 мл	0,5 мл	3 х 1,8 мл

Состав Экстра-микса RT-qPCR:

50 мM Трис-НCl, рН 8.0 (при +25 °С);
100 мM NaCl;
MMLV-RH обратная транскриптаза;
HS-Taq ДНК-полимераза;
1 мМ ЭДТА;
5 мМ дитиотреитол;
50% (v/v) глицерин;
0,1% (v/v) NP-40.

Состав буфера RT-qPCR (2х):

100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при +25 °С);
150 мM КCl;
0,6 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
6 мМ MgCl₂;
8 мМ дитиотреитол;
стабилизаторы и усилители активности ферментов;
маркерные красители.

Преимущества использования экстра-микса:

Высокая специфичность.
Высокая чувствительность.
Простота и удобство в использовании.
Низкая ошибка пипетирования и вероятности кросс-контаминации.
Стандартизация условий постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
Возможность ТА-клонирования ПЦР-продуктов.
Сокращается стадия пробоподготовки для анализа результатов ПЦР - благодаря утяжеляющим добавкам и красителям, не требуется буфер для нанесения пробы на гель.

Область применения:

Одношаговая стандартная ОТ-ПЦР.
Анализ экспрессии генов.

Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.

Срок хранения и транспортировка:
9 месяцев при -20 °С; не более 30 циклов замораживания-размораживания экстра-микса RT-qPCR.

1971_Экстра-микс для RT-PCR Color, инструкция, Диаэм, русск., 5 стр.

Thermo FS

Буфер SuperScript IV RT Reaction Buffer

18090050B

5х1 мл

25 730, руб.

343,= USD

Thermo FS

Вода без нуклеаз, обработанная диэтилпирокарбонатом

R0603

5x1 мл

хранение -20°C

3 904, руб.

52,= USD

R0601

30 мл

хранение -20°C

6 443, руб.

86,= USD

Деионизованная вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК) и отфильтрованная через мембрану 0.22 мкм. Предназначена для экспериментов с использованием РНК.

Не содержит экзо- и эндонуклеаз, а также фосфатаз.

Не предназначена для ПЦР и экспериментов in vivo.

Thermo FS

Вода очищенная , для молекулярной биологии, без нуклеаз

R0581

4х1,25 мл

транспортировка +4°C

3 464, руб.

46,= USD

R0582

30 мл

6 679, руб.

89,= USD

Деионизованная вода, отфильтрованная через мембрану 0.22 мкм. Предназначена для молекулярной биологии.

Не содержит экзо- и эндонуклеаз, а также фосфатаз.

Диаэм

Вода стерильная, обработанная диэтилпирокарбонатом, свободная от ДНКаз и РНКаз, для работы с нуклеиновыми кислотами

3783.0005

5 мл

621, руб.

621, руб. RUB

3783.0050

50 мл

2 772, руб.

2 772, руб. RUB

Стерильная вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК), свободная от РНКаз и ДНКаз, предназначена для работы c ДНК и РНК, приготовления растворов для молекулярно-биологических работ, проведения различных молекулярно-биологических реакций.

Условия хранения: комнатная температура.

Thermo FS

Ингибитор РНКаз Ribolock, 40 ед/мкл

EO0382

4х2500 единиц

транспортировка -20°C

41 088, руб.

548,= USD

Ингибитор RiboLock ингибирует активность РНКаз А, В и С по неконкурентному механизму в соотношении 1 : 1. Не ингибирует эукариотические РНКазы T1, T2, U1, U2, CL3 и прокариотические РНКазы H и I.

Работает в большинстве реакционных смесей и защищает РНК от деградации при температурах до +55^оС.

Рекомендуемая рабочая концентрация - 1 ед/мкл.

В состав буфера для хранения входит ДТТ, который обеспечивает стабильность ингибитора, но не является необходимым компонентом реакционной смеси.

Области применения:

Предохранение РНК от деградации при транскрипции и трансляции in vitro, обратной транскрипции, амплификации РНК, выделении мРНК-протеинового комплекса из клеток млекопитающих;
выделение и хранение РНК;
исследование специфической РНКазной активности.

Условия хранения: -20^оС

Диаэм

Ингибитор РНКаз RiBond, 40 е.а./мкл

3784.2000

2000 e.a.

хранение -20°C

По запросу

3784.10000

10000 e.a.

хранение -20°C

33 792, руб.

33 792, руб. RUB

Ингибитор РНКаз RiBond ингибирует рибонуклеазную активность эукариотических ферментов, таких как РНКаза A, РНКаза B, РНКаза C, и защищает РНК от неспецифического гидролиза. Представляет собой рекомбинантный белок массой 50 кДа, экспрессируемый в E.coli, предназначен для использования в приложениях, где присутствие РНКаз может снизить качество результатов экспериментов, например при выделении РНК, синтезе кДНК, ОТ-ПЦР, транскрипции и трансляции in vitro.

Условия хранения: -20 °С.

Qiagen

Набор FastLane Cell cDNA Kit 50

215011

50 реакций

131 391, руб.

1 642,= EUR

Набор для синтеза комплементарной ДНК без выделения РНК из клеток для постановки реакции обратной транскрипции и получения комплементарной ДНК без предварительного выделения РНК из клеток; содержит смесь обратных транскриптаз для работы с мРНК в концентрации от 50 пкг до 1 мкг, адаптированные буферы, праймеры, реагент для удаления геномной ДНК, буферы для проведения лизиса клеток и стабилизации РНК.

Qiagen

Набор FastLane Cell Multiplex Kit 200

216513

200 реакций

398 502, руб.

4 981,= EUR

Наборы для проведения обратной транскрипции и постановки ПЦР в реальном времени объединяют с себе функции наборов для синтеза комплиментарной ДНК без выделения РНК из клеток и наборов для постановки ПЦР в реальном времени.

Qiagen

Набор FastLane Cell Multiplex NR Kit 200

216713

200 реакций

398 502, руб.

4 981,= EUR

Qiagen

Набор FastLane Cell Probe Kit 200

216413

200 реакций

376 604, руб.

4 708,= EUR

Qiagen

Набор FastLane Cell SYBR Green Kit 200

216213

200 реакций

404 450, руб.

5 056,= EUR

Bio-Rad

Набор iScript cDNA Synthesis Kit

1708890

25x20 мкл реакций

транспортировка -20°C

15 236, руб.

15 236, руб. RUB

1708891

100x20 мкл реакций

транспортировка -20°C

36 579, руб.

36 579, руб. RUB

Набор для проведения обратной транскрипции iScript
Содержит оптимизированную смесь праймеров; протокол длится 40 минут; высокая чувствительность – от 1 пкг РНК.

Bio-Rad

Набор iScript Select cDNA Synthesis Kit

1708896

25x20 мкл реакций

транспортировка -20°C

15 471, руб.

15 471, руб. RUB

1708897

100x20 мкл реакций

хранение -20°C

44 764, руб.

44 764, руб. RUB

Набор iScript Select для синтеза длинных кДНК, Bio-Rad содержит оптимизированную смесь праймеров; простая подготовка реакции и малое время прохождения; высокая чувствительность – от 1 пг РНК; содержит все необходимые компоненты; размер синтезируемого продукта от 6 000 п.о. и более.

Bio-Rad

Набор iTaq Universal Probes One-Step Kit

1725140

100x20 мкл реакций

22 179, руб.

22 179, руб. RUB

1725141

500x20 мкл реакций

62 957, руб.

62 957, руб. RUB

Bio-Rad

Набор iTaq Universal SYBR Green One-Step Kit

1725150

100x20 мкл реакций

транспортировка -20°C

21 107, руб.

21 107, руб. RUB

1725151

500x20 мкл реакций

хранение -20°C

По запросу

Qiagen

Набор Omniscript RT Kit

205110

10 реакций

По запросу

205111

50 реакций

53 260, руб.

666,= EUR

205113

200 реакций

хранение -30...-15°C

180 057, руб.

2 251,= EUR

Для постановки реакции ПЦР с обратной транскрипцией; содержат обратную транскриптазу Omniscript для работы с 50 нг – 2 мкг мРНК или смесь транскриптаз Qantiscript — для работы с малыми количествами мРНК — 10 пг – 1мкг.

Qiagen

Набор QuantiTect Rev. Transcription Kit

205310

10 реакций

транспортировка -20°C

20 818, руб.

260,= EUR

205311

50 реакций

транспортировка -20°C

73 040, руб.

913,= EUR

205314

400 реакций

транспортировка -20°C

452 302, руб.

5 654,= EUR

Qiagen

Набор QuantiTect Virus +ROX Vial Kit

211031

50 реакций

56 234, руб.

703,= EUR

211033

200 реакций

194 926, руб.

2 437,= EUR

211035

1000 реакций

805 926, руб.

10 074,= EUR

Наборы для постановки ПЦР в реальном времени для ПЦР в реальном времени геномной, вирусной и комплиментарной ДНК, в том числе для анализа мРНК: QuantiTect - наборы для стандартной ПЦР на основе HotStarTaq рекомбинантной ДНК-полимеразы из Th. aquaticus (94 кДа), активирующейся в течение 15 мин при 95 °С); QuantiFast - наборы для высокоскоростной ПЦР на основе HotStarTaq Plus рекомбинантной ДНК-полимеразы, активирующейся в течение 5 мин при 95 °С).
Наборы содержат красители (опционально ROX, SYBRgreen), буферы, нуклеотиды и активные компоненты в формате мастер-микс (готовая валидированная смесь для проведения эффективной ПЦР в режиме реального времени с системами детекции SYBRgreen, TaqMan, FRET probes, Molecular Beacons); совместно с наборами QuantiTect возможно использование урацил-N-гликозилазы (для удаления ПЦР-продуктов, инактивируется при 95 °С в течение 15 мин).

Qiagen

Набор QuantiTect Virus Kit

211011

50 реакций

По запросу

211013

200 реакций

200 332, руб.

2 504,= EUR

211015

1000 реакций

805 926, руб.

10 074,= EUR

Bio-Rad

Набор Reliance One-Step Multiplex Supermiх

12010220

1000x20 мкл реакций

12 721 714, руб.

159 021,= EUR

Qiagen

Набор Sensiscript RT Kit

205211

50 реакций

58 126, руб.

727,= EUR

205213

200 реакций

198 171, руб.

2 477,= EUR

Обратные транскриптазы для постановки реакции ПЦР с обратной транскрипцией и получения комплементарной ДНК; содержат все необходимые компоненты для проведения реакции: обратную транскриптазу (Omniscript – для работы с 50 нг – 2 мкг мРНК, Sensiscript – для работы с малыми количествами мРНК (до 50 нг) или смесь ферментов – для работы с мРНК в концентрации от 10 пкг до 1 мкг), адаптированные буферы, праймеры; возможно наличие реагента для удаления геномной ДНК.