Набор реактивов для обратной транкрипции с MMLV–RH представляет собой полную систему для эффективного синтеза первой цепи кДНК с использованием в качестве матрицы мРНК или суммарной РНК. Набор содержит все необходимые компоненты для проведения обратной транскрипции: обратную транскриптазу MMLV–RH, два варианта 5× ОТ-буфера, смесь dNTP, раствор ДТТ, растворы олиго(dT)16
праймера и случайного гексапраймера, а также свободную от РНКаз воду.
MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.
Кроме обратной транскриптазы, набор содержит два типа буфера на основе KCl и (NH4)2SO4, оптимизированные для проведения эффективной реакции обратной транскрипции с любых матриц РНК, в том числе содержащих участки повышенной сложности (сильно структурированные или GC-богатые).
Олиго(dT)16 праймер и случайный гексапраймер позволяют более узконаправленно подходить к обратной транскрипции интересующих типов или участков РНК. Случайный гексапраймер неспецифически связывается с РНК-матрицей и используется для синтеза кДНК со всех типов РНК в составе суммарной РНК. Олиго(dT)16
праймер селективно отжигается на полиадениновых последовательностях РНК, обеспечивая синтез кДНК только с мРНК, содержащих поли(А)-3’-конец. Также можно использовать специфичные праймеры для синтеза определённой последовательности.
Состав набора
Компонент
Кат. #
1967.0050
1959.0250
MMLV-RH ревертаза, 100 ед. акт./ мкл*
1 × 50 мкл (5000 ед.акт.)
2 × 250 мкл (25000 ед.акт.)
5× ОТ-буфер (KCl)
1 × 220 мкл
3 × 400 мкл
5× ОТ-буфер ((NH4)2SO4)
1 × 220 мкл
3 × 400 мкл
20× смесь dNTP (10 мМ каждого)
1 × 120 мкл
2 × 300 мкл
Дитиотреитол
1 × 110 мкл
2 × 260 мкл
Случайный гексапраймер, 20 мкМ
1 × 50 мкл
1 × 260 мкл
Олиго(dT) праймер, 20 мкМ
1 × 50 мкл
1 × 260 мкл
Вода, обработанная ДЭПК
3 × 600 мкл
5 × 1.8 мл
* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 1 нмоль dTMP в кислотонерастворимый продукт за 10 мин при +37 °С.
Источник
Фермент получен из рекомбинантного штамма Е. coli, содержащего делеционный вариант гена обратной транскриптазы MMLV.
Буфер для хранения:
50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при +25°C), 100 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 5 мМ дитиотреитол, 50 % (v/v) глицерин и 0.1 % (v/v) NP-40.
5× ОТ-буфер (KCl):
250 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при +25°C), 250 мM KCl, 20 мМ MgCl2, стабилизаторы.
5× ОТ-буфер ((NH4)2SO4):
250 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при +25°C), 100 мM (NH4)2SO4, 20 мМ MgCl2, стабилизаторы.
Область применения:
Синтез первой цепи кДНК для ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в режиме реального времени.
Синтез кДНК для клонирования.
Получение меченых кДНК-зондов для микрочипов (microarray).
Мечение ДНК.
Анализ РНК с помощью праймер-экстеншн.
Хранение и транспортировка:
при -20°С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.
Экстра-микс RT-qPCR SYBR Blue предназначен для проведения обратной транскрипции и количественной ПЦР в режиме реального времени одношаговым методом с использованием флуоресцентного красителя SYBR Green I. Кроме собственно экстра-микса RT-qPCR, в состав набора входят 2-кратный буфер RT-qPCR SYBR Blue и вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК). Буфер оптимизирован для протекания как обратной транскрипции, так и ПЦР (в том числе на сложных и GC-богатых матрицах) и содержит все необходимые компоненты (за исключением РНК-матрицы и праймеров), а также интеркалирующий краситель SYBR Green I. Хранение буфера при комнатной температуре в течение 2 дней не снижает эффективность реакции. Инертный краситель в составе Экстра-микса окрашивает его в голубой цвет (максимум поглощения – 615 нм) и облегчает контроль за раскапыванием смеси при использовании многолуночных планшетов.
Экстра-микс RT-qPCR представляет собой смесь обратной транскриптазы MMLV-RH и HS-Taq ДНК-полимеразы с "горячим" стартом в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций.
MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.
HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре ниже +70оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95°С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; обладает способностью присоединять аденин к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.
SYBR Green I - флуоресцентный интеркалирующий краситель для количественной и качественной детекции продуктов в ходе ПЦР в режиме реального времени. SYBR Green I обеспечивает простой и экономичный вариант для детекции и количественного определения ПЦР-продуктов без необходимости использования специфичных флуоресцентных зондов (в том числе в режиме реального времени). В ходе амплификации краситель SYBR Green I встраивается в малую бороздку ДНК ПЦР-продуктов и испускает более сильный по сравнению с несвязанным красителем флуоресцентный сигнал. Максимумы поглощения и испускания SYBR Green I - 494 нм и 521 нм соответственно, что позволяет использовать его со всеми известными на сегодняшний день амплификаторами для проведения ПЦР в режиме реального времени.
Состав набора
Кат. №
Кол-во реакций по 50 мкл
Экстра-микс RT-qPCR
Буфер RT-qPCR SYBR Blue(2x)
ДМСО
Вода, обработанная ДЭПК
1969.0040
40
80 мкл
2 х 0,5 мл
0,5 мл
2 х 0,5 мл
1969.0200
200
2 х 200 мкл
4 х 1,25 мл
0,5 мл
3 х 1,8 мл
Состав Экстра-микса RT-qPCR:
50 мM Трис-НCl, рН 8.0 (при +25 °С);
100 мM NaCl;
MMLV-RH обратная транскриптаза;
HS-Taq ДНК-полимераза;
1 мМ ЭДТА;
5 мМ дитиотреитол;
50% (v/v) глицерин;
0,1% (v/v) NP-40.
Состав буфера RT-qPCR SYBR Blue (2х):
100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при +25 °С);
150 мM КCl;
0,6 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
10 мМ MgCl₂;
8 мМ дитиотреитол;
интеркалирующий краситель SYBR Green I;
инертный краситель;
стабилизаторы и усилители активности ферментов.
Преимущества использования экстра-микса:
Высокая специфичность.
Высокая чувствительность.
Простота и удобство в использовании.
Низкая ошибка пипетирования и вероятности кросс-контаминации.
Стандартизация условий постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
Возможность ТА-клонирования ПЦР-продуктов.
Область применения:
Одношаговая стандартная ОТ-ПЦР.
Количественный анализ РНК, в том числе анализ экспрессии генов.
Ограничения к использованию:
Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.
Не рекомендуется использовать для ПЦР с флуоресцентными зондами.
Срок хранения и транспортировка:
9 месяцев при -20 °С; не более 30 циклов замораживания- азмораживания экстра-микса RT-qPCR.
Экстра-микс RT-PCR Color предназначен для проведения обратной транскрипции и ПЦР одношаговым методом. Кроме собственно экстра-микса, в состав набора входят 2-кратный буфер RT-PCR Color, ДМСО и вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК). Буфер оптимизирован для протекания как обратной транскрипции, так и ПЦР и содержит все необходимые компоненты (за исключением РНК-матрицы и праймеров). Хранение буфера при комнатной температуре в течение 2 дней не снижает эффективность реакции. Буфер содержит красители, не влияющие на работу ферментов, и компоненты, увеличивающие плотность пробы для удобства нанесения на гель. Экстра-микс RT-PCR Color представляет собой смесь обратной транскриптазы MMLV-RH и HS-Taq ДНК-полимеразы с "горячим" стартом в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций.
MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.
HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре ниже +70оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95°С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; обладает способностью присоединять аденин к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.
Состав набора
Кат. №
Кол-во реакций по 50 мкл
Экстра-микс RT-PCR Color
Буфер RT-PCR Color (2x)
ДМСО
Вода, обработанная ДЭПК
1971.0040
40
80 мкл
2 х 0,5 мл
0,5 мл
2 х 0,5 мл
1971.0200
200
2 х 200 мкл
4 х 1,25 мл
0,5 мл
3 х 1,8 мл
Состав Экстра-микса RT-qPCR:
50 мM Трис-НCl, рН 8.0 (при +25 °С);
100 мM NaCl;
MMLV-RH обратная транскриптаза;
HS-Taq ДНК-полимераза;
1 мМ ЭДТА;
5 мМ дитиотреитол;
50% (v/v) глицерин;
0,1% (v/v) NP-40.
Состав буфера RT-qPCR (2х):
100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при +25 °С);
150 мM КCl;
0,6 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
6 мМ MgCl₂;
8 мМ дитиотреитол;
стабилизаторы и усилители активности ферментов;
маркерные красители.
Преимущества использования экстра-микса:
Высокая специфичность.
Высокая чувствительность.
Простота и удобство в использовании.
Низкая ошибка пипетирования и вероятности кросс-контаминации.
Стандартизация условий постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
Возможность ТА-клонирования ПЦР-продуктов.
Сокращается стадия пробоподготовки для анализа результатов ПЦР - благодаря утяжеляющим добавкам и красителям, не требуется буфер для нанесения пробы на гель.
Область применения:
Одношаговая стандартная ОТ-ПЦР.
Анализ экспрессии генов.
Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.
Срок хранения и транспортировка:
9 месяцев при -20 °С; не более 30 циклов замораживания-размораживания экстра-микса RT-qPCR.
Деионизованная вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК) и отфильтрованная через мембрану 0.22 мкм. Предназначена для экспериментов с использованием РНК.
Не содержит экзо- и эндонуклеаз, а также фосфатаз.
Стерильная вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК), свободная от РНКаз и ДНКаз, предназначена для работы c ДНК и РНК, приготовления растворов для молекулярно-биологических работ, проведения различных молекулярно-биологических реакций.
Ингибитор RiboLock ингибирует активность РНКаз А, В и С по неконкурентному механизму в соотношении 1 : 1. Не ингибирует эукариотические РНКазы T1, T2, U1, U2, CL3 и прокариотические РНКазы H и I.
Работает в большинстве реакционных смесей и защищает РНК от деградации при температурах до +55оС.
Рекомендуемая рабочая концентрация - 1 ед/мкл.
В состав буфера для хранения входит ДТТ, который обеспечивает стабильность ингибитора, но не является необходимым компонентом реакционной смеси.
Области применения:
Предохранение РНК от деградации при транскрипции и трансляции in vitro, обратной транскрипции, амплификации РНК, выделении мРНК-протеинового комплекса из клеток млекопитающих;
Ингибитор РНКаз RiBond ингибирует рибонуклеазную активность эукариотических ферментов, таких как РНКаза A, РНКаза B, РНКаза C, и защищает РНК от неспецифического гидролиза. Представляет собой рекомбинантный белок массой 50 кДа, экспрессируемый в E.coli, предназначен для использования в приложениях, где присутствие РНКаз может снизить качество результатов экспериментов, например при выделении РНК, синтезе кДНК, ОТ-ПЦР, транскрипции и трансляции in vitro.
Набор для синтеза комплементарной ДНК без выделения РНК из клеток для постановки реакции обратной транскрипции и получения комплементарной ДНК без предварительного выделения РНК из клеток; содержит смесь обратных транскриптаз для работы с мРНК в концентрации от 50 пкг до 1 мкг, адаптированные буферы, праймеры, реагент для удаления геномной ДНК, буферы для проведения лизиса клеток и стабилизации РНК.
Наборы для проведения обратной транскрипции и постановки ПЦР в реальном времени объединяют с себе функции наборов для синтеза комплиментарной ДНК без выделения РНК из клеток и наборов для постановки ПЦР в реальном времени.
Наборы для проведения обратной транскрипции и постановки ПЦР в реальном времени объединяют с себе функции наборов для синтеза комплиментарной ДНК без выделения РНК из клеток и наборов для постановки ПЦР в реальном времени.
Наборы для проведения обратной транскрипции и постановки ПЦР в реальном времени объединяют с себе функции наборов для синтеза комплиментарной ДНК без выделения РНК из клеток и наборов для постановки ПЦР в реальном времени.
Наборы для проведения обратной транскрипции и постановки ПЦР в реальном времени объединяют с себе функции наборов для синтеза комплиментарной ДНК без выделения РНК из клеток и наборов для постановки ПЦР в реальном времени.
Набор для проведения обратной транскрипции iScript
Содержит оптимизированную смесь праймеров; протокол длится 40 минут; высокая чувствительность – от 1 пкг РНК.
Набор iScript Select для синтеза длинных кДНК, Bio-Rad содержит оптимизированную смесь праймеров; простая подготовка реакции и малое время прохождения; высокая чувствительность – от 1 пг РНК; содержит все необходимые компоненты; размер синтезируемого продукта от 6 000 п.о. и более.
Для постановки реакции ПЦР с обратной транскрипцией; содержат обратную транскриптазу Omniscript для работы с 50 нг –
2 мкг мРНК или смесь транскриптаз Qantiscript — для работы с малыми количествами мРНК — 10 пг – 1мкг.
Для постановки реакции ПЦР с обратной транскрипцией; содержат обратную транскриптазу Omniscript для работы с 50 нг –
2 мкг мРНК или смесь транскриптаз Qantiscript — для работы с малыми количествами мРНК — 10 пг – 1мкг.
Наборы для постановки ПЦР в реальном времени для ПЦР в реальном времени геномной, вирусной и комплиментарной ДНК, в том числе для анализа мРНК: QuantiTect - наборы для стандартной ПЦР на основе HotStarTaq рекомбинантной ДНК-полимеразы из Th. aquaticus (94 кДа), активирующейся в течение 15 мин при 95 °С); QuantiFast - наборы для высокоскоростной ПЦР на основе HotStarTaq Plus рекомбинантной ДНК-полимеразы, активирующейся в течение 5 мин при 95 °С).
Наборы содержат красители (опционально ROX, SYBRgreen), буферы, нуклеотиды и активные компоненты в формате мастер-микс (готовая валидированная смесь для проведения эффективной ПЦР в режиме реального времени с системами детекции SYBRgreen, TaqMan, FRET probes, Molecular Beacons); совместно с наборами QuantiTect возможно использование урацил-N-гликозилазы (для удаления ПЦР-продуктов, инактивируется при 95 °С в течение 15 мин).
Наборы для постановки ПЦР в реальном времени для ПЦР в реальном времени геномной, вирусной и комплиментарной ДНК, в том числе для анализа мРНК: QuantiTect - наборы для стандартной ПЦР на основе HotStarTaq рекомбинантной ДНК-полимеразы из Th. aquaticus (94 кДа), активирующейся в течение 15 мин при 95 °С); QuantiFast - наборы для высокоскоростной ПЦР на основе HotStarTaq Plus рекомбинантной ДНК-полимеразы, активирующейся в течение 5 мин при 95 °С).
Наборы содержат красители (опционально ROX, SYBRgreen), буферы, нуклеотиды и активные компоненты в формате мастер-микс (готовая валидированная смесь для проведения эффективной ПЦР в режиме реального времени с системами детекции SYBRgreen, TaqMan, FRET probes, Molecular Beacons); совместно с наборами QuantiTect возможно использование урацил-N-гликозилазы (для удаления ПЦР-продуктов, инактивируется при 95 °С в течение 15 мин).
Обратные транскриптазы для постановки реакции ПЦР с обратной транскрипцией и получения комплементарной ДНК; содержат все необходимые компоненты для проведения реакции: обратную транскриптазу (Omniscript – для работы с 50 нг – 2 мкг мРНК, Sensiscript – для работы с малыми количествами мРНК (до 50 нг) или смесь ферментов – для работы с мРНК в концентрации от 10 пкг до 1 мкг), адаптированные буферы, праймеры; возможно наличие реагента для удаления геномной ДНК.
Для повышения удобства работы с сайтом на нем используются файлы cookie.
В cookie содержатся данные о Ваших прошлых посещениях сайта. Если Вы не хотите, чтобы эти данные
обрабатывались, отключите cookie в настройках браузера.