Блоттинг — общее название наиболее распространённого лабораторного метода изучения белков и нуклеиновых кислот.
Протокол блоттинга состоит из нескольких этапов: разделение смеси фрагментов белков или нуклеиновых кислот методом электрофореза в полимерном геле (полиакриламидном или агарозном); перенос фрагментов из геля на поверхность нитроцеллюлозной или PVDF мембраны; детекция перенесенных фрагментов на поверхности мембраны за счёт специфичного связывания с фрагментами комплементарных молекул, конъюгированных метками (изотопными, флуоресцентными, люминесцентными или хромогенными); визуализация обработанной мембраны с использованием гель- и хемидокументирующих систем.
детекция перенесенных фрагментов на поверхности мембраны за счёт специфичного связывания с фрагментами комплементарных молекул, конъюгированных метками (изотопными, флуоресцентными, люминесцентными
или хромогенными);
В зависимости от изучаемого вещества выделяют несколько разновидностей блоттинга:
Саузерн-блоттинг (Southern blot) — метод изучения ДНК с фракционированием методом электрофореза в агарозном геле и переносом разделенных фрагментов ДНК на нитроцеллюлозную мембрану для последующей гибридизации. Метод назван по имени изобретателя, английского биолога Эдвина Саузерна и является созвучным слову Southern (англ. "южный").
Нозерн-блоттинг (Northern blot) — метод изучения смеси РНК и мРНК в образцах. Метод разработан Дж. Олвайном, Д. Кемпом и Дж. Старком для изучения РНК и напоминает методику Э. Саузерна. Но поскольку есть некоторые принципиальные отличия (объект исследования РНК, мембрана из диазобензилоксиметил-целлюлозы), авторы решили подчеркнуть эти отличия и назвать метод Northern blot (англ. "северный") в противоположность методу Southern blot.
Вестерн-блоттинг (Western blot) — метод обнаружения специфичных белков в образце с фракционированием методом электрофореза в полиакриламидном геле с добавлением натрия додецилсульфата, с последующим переносом фрагментов на нитроцеллюлозную мембрану. Детекция целевых фрагментов на мембране осуществляется с использованием первичных
и добавлением вторичных
антител, меченых пероксидазой хрена или флуоресцентной меткой. Название метода Western blot (англ. "западный") является игрой английских слов и было дано У. Нейлом Бурнеттом, чтобы подчеркнуть отличие от метода Southern blot.
Саузвестерн-блоттинг (Southwestern blot) — метод изучения белков, связанных с ДНК. Поскольку метод изучает комплекс ДНК-белок, учёные решили отобразить в названии комбинацию названий двух методов Southern blot и Western blot, присвоив название Southwestern blot (англ. "юго-западный").
Истерн-блоттинг (Eastern blotting) — метод изучения посттрансляционных модификаций белков с фракционированием белков методом электрофореза в полиакриламидном геле с добавлением натрия додецилсульфата, с последующим переносом фрагментов на мембрану из нитроцеллюлозы или PVDF. Придерживаясь тенденции в наименовании модификации методов Эдвина Саузерна, данный метод был назван Eastern blot (англ. "восточный").
.jpg)
.jpg)
.jpg)
.jpg)
