Блоттинг — общее название наиболее распространённого лабораторного метода изучения белков и нуклеиновых кислот.
Протокол блоттинга состоит из нескольких этапов: разделение смеси фрагментов белков или нуклеиновых кислот методом электрофореза в полимерном геле (полиакриламидном или агарозном); перенос фрагментов из геля на поверхность нитроцеллюлозной или PVDF мембраны; детекция перенесенных фрагментов на поверхности мембраны за счёт специфичного связывания с фрагментами комплементарных молекул, конъюгированных метками (изотопными, флуоресцентными, люминесцентными или хромогенными); визуализация обработанной мембраны с использованием гель- и хемидокументирующих систем.
Система применяется для равномерного вакуумного переноса НК из агарозного
геля на нейлоновую мембрану.
Вакуумный блоттинг НК – нозерн-блоттинг и блоттинг по Саузерну;
площадь блоттинга, мм – до 200х250;
объем буфера, мл – до 200;
время переноса, мин – 30-90;
система изготовлена из пластика, устойчивого к разбавленным
кислотам и щелочам;
регулятор вакуума (опция).
Комплект поставки: устройство вакуумного переноса, пористая вакуумпроницаемая пластина, кольцевая уплотнительная прокладка для резервуара, зажимная уплотнительная рамка, крышка. Не включает в себя регулятор вакуума (заказываются дополнительно).
В отличие от обычного полусухого переноса, где основным механизмом движения реагентов является диффузия, в системе SNAP i.d.2.0 используется вакуум для активного переноса реагентов на мембрану.
Система применима для проведения вестерн-блоттинга, ускоряя стадии блокировки мембраны, инкубации с антителами и промывки:
площадь блоттинга, мм — 75 х 84 (мини) / 87 х 135 (миди);
совместима с нитроцеллюлозными и PVDF-мембранами и всеми распространенными реагентами для блоттинга (флуоресцентными, хемилюминесцентными, хромогенными);
возможно работать независимо с 2 гелями;
уменьшает время инкубации с антителами до 10 мин, суммарное время блокировки, инкубации с антителами и промывки до 30 мин;
снижает уровень фонового сигнала, т.к. излишки реагентов удаляются под действием вакуума;
эффективная блокировка мембраны с использованием низких концентраций блокирующего агента (0,05–0,5% обезжиренного сухого молока NFDM) исключает риск переблокировки;
чувствительность такая же или лучше, чем при традиционной технике иммунодетекции;
воспроизводимость условий блоттинга и получаемых результатов;
коллектор для сбора первичных антител для повторного использования;
совместима с вакуумным насосом, вакуум 410 мбар, 34 л/мин, например, WP6222050, Millipore (опция);
габариты, Д х В х Г, cм — 40,6 х 8,8 х 32,4.
Для защиты вакуумного насоса от контаминации рекомендуется использовать колбу Бунзена на 1 л (опция) и фильтрующую насадку SLFA05010, Millipore (опция), как показано на схеме выше.
В отличие от обычного полусухого переноса, где основным механизмом движения реагентов является диффузия, в системе SNAP i.d.2.0 используется вакуум для активного переноса реагентов на мембрану.
Система применима для проведения вестерн-блоттинга, ускоряя стадии блокировки мембраны, инкубации с антителами и промывки:
площадь блоттинга, мм — 75 х 84 (мини) / 87 х 135 (миди);
совместима с нитроцеллюлозными и PVDF-мембранами и всеми распространенными реагентами для блоттинга (флуоресцентными, хемилюминесцентными, хромогенными);
возможно работать независимо с 2 гелями;
уменьшает время инкубации с антителами до 10 мин, суммарное время блокировки, инкубации с антителами и промывки до 30 мин;
снижает уровень фонового сигнала, т.к. излишки реагентов удаляются под действием вакуума;
эффективная блокировка мембраны с использованием низких концентраций блокирующего агента (0,05–0,5% обезжиренного сухого молока NFDM) исключает риск переблокировки;
чувствительность такая же или лучше, чем при традиционной технике иммунодетекции;
воспроизводимость условий блоттинга и получаемых результатов;
коллектор для сбора первичных антител для повторного использования;
совместима с вакуумным насосом, вакуум 410 мбар, 34 л/мин, например, WP6222050, Millipore (опция);
габариты, Д х В х Г, cм — 40,6 х 8,8 х 32,4.
Для защиты вакуумного насоса от контаминации рекомендуется использовать колбу Бунзена на 1 л (опция) и фильтрующую насадку SLFA05010, Millipore (опция), как показано на схеме выше.
В отличие от обычного полусухого переноса, где основным механизмом движения реагентов является диффузия, в системе SNAP i.d.2.0 используется вакуум для активного переноса реагентов на мембрану.
Система применима для проведения вестерн-блоттинга, ускоряя стадии блокировки мембраны, инкубации с антителами и промывки:
площадь блоттинга, мм — 75 х 84 (мини) / 87 х 135 (миди);
совместима с нитроцеллюлозными и PVDF-мембранами и всеми распространенными реагентами для блоттинга (флуоресцентными, хемилюминесцентными, хромогенными);
возможно работать независимо с 2 гелями;
уменьшает время инкубации с антителами до 10 мин, суммарное время блокировки, инкубации с антителами и промывки до 30 мин;
снижает уровень фонового сигнала, т.к. излишки реагентов удаляются под действием вакуума;
эффективная блокировка мембраны с использованием низких концентраций блокирующего агента (0,05–0,5% обезжиренного сухого молока NFDM) исключает риск переблокировки;
чувствительность такая же или лучше, чем при традиционной технике иммунодетекции;
воспроизводимость условий блоттинга и получаемых результатов;
коллектор для сбора первичных антител для повторного использования;
совместима с вакуумным насосом, вакуум 410 мбар, 34 л/мин, например, WP6222050, Millipore (опция);
габариты, Д х В х Г, cм — 40,6 х 8,8 х 32,4.
Для защиты вакуумного насоса от контаминации рекомендуется использовать колбу Бунзена на 1 л (опция) и фильтрующую насадку SLFA05010, Millipore (опция), как показано на схеме выше.
Система для высокоэффективного вестерн-блоттинга и переноса НК с возможностью
работы с готовыми гелями; перенос 2-х гелей Criterion или 4-х гелей Mini-Protean.
электроблоттинг, погружение геля в буфер;
площадь блоттинга, см – 15х9,4;
количество кассет – 2;
объем буфера, мл – 1300;
расстояние между электродами, мм – 43;
время проведения блоттинга, мин – 30 – 60;
поддон для сборки “сэндвича”;
ролик для удаления воздушных пузырьков;
прокладки из вспененного полимера;
охлаждающий элемент Sealed Ice Block;
охлаждающий змеевик (опция);
рекомендуемые характеристики источника питания, напряжение, В / сила тока, А – 5-250 / 0,01-3;
габариты, ДхВхГ, мм – 118х150х218.
Комплект поставки: резервуар для буфера с крышкой и электродами, две кассеты для фиксации геля, две прокладки из вспененного полимера, электроды в виде пластин или проволоки (на выбор), охлаждающий элемент Sealed Ice Block, поддон для сборки "сэндвича", ролик для удаления воздушных пузырьков. Не включает охлаждающий элемент в виде змеевик (заказывается дополнительно).
Система для высокоэффективного вестерн-блоттинга и переноса НК с возможностью
работы с готовыми гелями; перенос 2-х гелей Criterion или 4-х гелей Mini-Protean.
электроблоттинг, погружение геля в буфер;
площадь блоттинга, см – 15х9,4;
количество кассет – 2;
объем буфера, мл – 1300;
расстояние между электродами, мм – 43;
время проведения блоттинга, мин – 30 – 60;
поддон для сборки “сэндвича”;
ролик для удаления воздушных пузырьков;
прокладки из вспененного полимера;
охлаждающий элемент Sealed Ice Block;
охлаждающий змеевик (опция);
рекомендуемые характеристики источника питания, напряжение, В / сила тока, А – 5-250 / 0,01-3;
габариты, ДхВхГ, мм – 118х150х218.
Комплект поставки: резервуар для буфера с крышкой и электродами, две кассеты для фиксации геля, две прокладки из вспененного полимера, электроды в виде пластин или проволоки (на выбор), охлаждающий элемент Sealed Ice Block, поддон для сборки "сэндвича", ролик для удаления воздушных пузырьков. Не включает охлаждающий элемент в виде змеевик (заказывается дополнительно).
простой автоматический количественный анализ в программе Image Lab с нормализацией по общему белку или по белкам домашнего обихода (House Keeping Protein).
Система Trans-Blot SD Semy Dry для “полусухого” переноса белков и НК (электроблоттинг) с использованием малого количества буфера.
Площадь блоттинга, см – 24 х 16;
объем буфера, мл – ≤ 200;
расстояние между электродами определяется толщиной «сэндвича»;
время проведения блоттинга, мин – 15 - 60;
рамка для фиксации агарозных гелей;
набор Trans-Blot SD DNA/RNA для переноса НК (опция);
рекомендуемые характеристики источника питания, напряжение, В / сила тока, А – 5-500 / 0,01-3,0;
габариты, ДхВхШ, мм – 240х110х370;
вес, кг – 3,7;
Комплект поставки: камера, защитная крышка, титановый анод и стальной катод в виде пластин, рамка для фиксации агарозных гелей, фильтровальная экстра-толстая бумага для блоттинга (4 размера по 60 листов), размер, мм - 70х84, 80х135, 140х160, 180х185.
Система Pierce Power Blotter разработана для полусухого метода переноса фракций белков с геля на мембрану при проведении вестерн-блоттинга.
Метод переноса — электроблоттинг;
эффективный комбинированный протокол переноса, перенос белков с молекулярной массой от 10 до 300 кДа;
площадь блоттинга, см — 8,0×13,5;
объем буфера, мл — 200-400;
время блоттинга, мин — 5-10;
одна кассета для блоттинга;
перенос до 4-х гелей мини формата за 1 запуск;
может использоваться со стандартными расходными материалами для «полусухого» переноса (мембраны, бумага, буферы), возможность работы с готовыми гелями;
встроенный источник питания;
встроенные протоколы переноса для белков с разной молекулярной массой и до 25 протоколов, настраиваемых пользователем;
ЖК-дисплей с подсветкой;
сенсорная панель управления.
Комплект поставки: система Pierce Power Blotter, 1 кассета, ролик для удаления пузырьков, набор расходных материалов.
Система iBlot 2 разработана для быстрого и воспроизводимого переноса белков и нуклеиновых кислот с геля на мембрану при проведении вестерн-блоттинга. При переносе используются готовые кассеты с встроенными электродами и мембранами, смоченные буфером, что обеспечивает максимальную воспроизводимость результатов по сравнению с ручными методами проведения блоттинга.
Метод переноса— электроблоттинг;
площадь блоттинга, см — 13,5х10,8
буфер для переноса – не требуется;
время блоттинга, мин — 3-7;
встроенный источник питания;
встроенные протоколы переноса для белков с разной молекулярной массой и до 25 протоколов, настраиваемых пользователем;
ЖК-дисплей с подсветкой;
сенсорная панель управления.
Комплект поставки: cистема iBlot 2, ролик для удаления пузырьков/
детекция перенесенных фрагментов на поверхности мембраны за счёт специфичного связывания с фрагментами комплементарных молекул, конъюгированных метками (изотопными, флуоресцентными, люминесцентными
или хромогенными);
В зависимости от изучаемого вещества выделяют несколько разновидностей блоттинга:
Саузерн-блоттинг (Southern blot) — метод изучения ДНК с фракционированием методом электрофореза в агарозном геле и переносом разделенных фрагментов ДНК на нитроцеллюлозную мембрану для последующей гибридизации. Метод назван по имени изобретателя, английского биолога Эдвина Саузерна и является созвучным слову Southern (англ. "южный").
Нозерн-блоттинг (Northern blot) — метод изучения смеси РНК и мРНК в образцах. Метод разработан Дж. Олвайном, Д. Кемпом и Дж. Старком для изучения РНК и напоминает методику Э. Саузерна. Но поскольку есть некоторые принципиальные отличия (объект исследования РНК, мембрана из диазобензилоксиметил-целлюлозы), авторы решили подчеркнуть эти отличия и назвать метод Northern blot (англ. "северный") в противоположность методу Southern blot.
Вестерн-блоттинг (Western blot) — метод обнаружения специфичных белков в образце с фракционированием методом электрофореза в полиакриламидном геле с добавлением натрия додецилсульфата, с последующим переносом фрагментов на нитроцеллюлозную мембрану. Детекция целевых фрагментов на мембране осуществляется с использованием первичных
и добавлением вторичных
антител, меченых пероксидазой хрена или флуоресцентной меткой. Название метода Western blot (англ. "западный") является игрой английских слов и было дано У. Нейлом Бурнеттом, чтобы подчеркнуть отличие от метода Southern blot.
Саузвестерн-блоттинг (Southwestern blot) — метод изучения белков, связанных с ДНК. Поскольку метод изучает комплекс ДНК-белок, учёные решили отобразить в названии комбинацию названий двух методов Southern blot и Western blot, присвоив название Southwestern blot (англ. "юго-западный").
Истерн-блоттинг (Eastern blotting) — метод изучения посттрансляционных модификаций белков с фракционированием белков методом электрофореза в полиакриламидном геле с добавлением натрия додецилсульфата, с последующим переносом фрагментов на мембрану из нитроцеллюлозы или PVDF. Придерживаясь тенденции в наименовании модификации методов Эдвина Саузерна, данный метод был назван Eastern blot (англ. "восточный").
.jpg)
.jpg)
.jpg)
