Новый набор для эффективной экстракции бактериального белка, НЭББ, diaGene | Диаэм


Новый набор для эффективной экстракции бактериального белка, НЭББ, diaGene

23.03.2021
Исследуемый белок может теряться на каждом этапе экстракции и очистки, поэтому необходимо выбрать наиболее оптимальный метод разрушения клеточной стенки, позволяющий получить максимально возможный выход и чистоту белка. Лизис клеток является важным этапом экстракции и дальнейшей очистки внутриклеточных белков. Метод, используемый для лизиса клеточной стенки, может в значительной степени влиять на успешность и воспроизводимость последующих приложений. Исследуемый белок может теряться на каждом этапе экстракции и очистки, поэтому необходимо выбрать наиболее оптимальный метод разрушения клеточной стенки, позволяющий получить максимально возможный выход и чистоту белка.

Новый набор для экстракции бактериального белка, НЭББ, diaGene выделяет белки не денатурируя их, не содержит детергенты и компоненты, мешающие последующим применениям. НЭББ более эффективен, чем традиционная обработка ультразвуком и приготовленные в лаборатории буферы для лизиса, при этом он гораздо дешевле, чем существующие аналоги.

НЭББ это готовый к использованию реагент для лизиса клеток, представляющий собой раствор на основе неионогенных детергентов, которые эффективно разрушают клетки и солюбилизируют нативные или рекомбинантные белки без денатурации. Детергент входящий в состав НЭББ создает отверстия в клеточной мембране, освобождая цитозольные белки и бактериальную хромосому. После высвобождения хромосомы, раствор может стать вязким, что затрудняет последующую очистку бактериального белка. В этом случае рекомендуется добавить бензонуклеазу к реакционной смеси для снижения вязкости раствора. Для лучшей эффективности лизиса и при наличии телец включения рекомендуем добавить лизоцим к реакционной смеси.

Детергент входящий в состав НЭББ создает отверстия в клеточной мембране, освобождая цитозольные белки и бактериальную хромосому. Все реагенты НЭББ совместимы с последующими приложениями, такими как ионообменная и аффинная хроматография (например, аффинная хроматография с иммобилизованным металлом, хроматография с глутатионом), SDS-электрофорез, количественное определение белка методом BCA или методом Брэдфорда. В зависимости от конкретного применения, к реагенту могут быть добавлены ингибиторы протеаз, соли, восстанавливающие агенты, денатурирующие агенты и хелатирующие агенты кроме ЭДТА.

Особенности набора для экстракции бактериального белка, НЭББ:


  • Готов к использованию — одностадийный лизис клеток грамотрицательных бактерий с использованием мягкого неионогенного детергента в составе буфера.
  • Удобен в использовании — добавьте реагент в бактериальный осадок, инкубируйте при перемешивании в течение 10–15 минут и извлеките растворимые белки после осаждения остатков клеток.
  • Обеспечивает высокий выход рекомбинантных белков из бактериальных лизатов или очистку телец включения до почти гомогенного состояния.
  • Подходит для любого масштаба экстракции белка и доступен в нескольких форматах.
  • Совместим с добавлением ингибиторов протеаз.

В качестве альтернативы набору для экстракции бактериального белка НЭББ, diaGene можно использовать набор для экстракции бактериального белка B-PER, Thermo FS, который включает реагент для экстракции бактериального белка B-PER, ДНКазу I и лизоцим.
Пока нет данных. Перейти в каталог
Фильтр
Цена в валюте производителя / в рублях
123456.0010
(на 10 г биомассы бактерий)
5 200,=
5 200,= RUB
Набор для экстракции бактериального белка, НЭББ — готовый к использованию реагент для лизиса клеток, представляющий собой раствор на основе неионогенных детергентов, которые эффективно разрушают клетки и солюбилизируют нативные или рекомбинантные белки без денатурации. Все реагенты НЭББ совместимы с последующими приложениями, такими как ионообменная и аффинная хроматография (например, аффинная хроматография с иммобилизованным металлом, хроматография с глутатионом), SDS-электрофорез, количественное определение белка методом BCA или методом Брэдфорда. В зависимости от конкретного применения, к реагенту могут быть добавлены ингибиторы протеаз, соли, восстанавливающие агенты, денатурирующие агенты и хелатирующие агенты кроме ЭДТА.

НЭББ более эффективен, чем традиционная обработка ультразвуком и приготовленные в лаборатории буферы для лизиса, многие, из которых содержат детергенты и компоненты, которые мешают последующим применениям.

  • Готов к использованию — одностадийный лизис клеток грамотрицательных бактерий с использованием мягкого неионогенного детергента в составе буфера.
  • Удобен в использовании — добавьте реагент в бактериальный осадок, инкубируйте при перемешивании в течение 10–15 минут и извлеките растворимые белки после осаждения остатков клеток.
  • Обеспечивает высокий выход рекомбинантных белков из бактериальных лизатов или очистку телец включения до почти гомогенного состояния.
  • Подходит для любого масштаба экстракции белка и доступен в нескольких форматах.
  • Совместим с добавлением ингибиторов протеаз.

Наборы для экстракции бактериального белка:

  • 123456.0010 НЭББ-10 (на 10 г биомассы бактерий):
    • 20хНЭББ-буфер 50 мл;
    • лизоцим, 0,2 мл, 50 мг/мл;
    • бензонуклеаза, 0,2 мл, 10000 ед/мл.
  • 123456.0025 НЭББ-25 (на 25 г биомассы бактерий):
    • 20хНЭББ-буфер 100 мл;
    • лизоцим, 0,5 мл, 50 мг/мл;
    • бензонуклеаза, 0,5 мл, 10000 ед/мл.
  • 123456.0100 НЭББ-100 (на 100 г биомассы бактерий);
    • 20хНЭББ-буфер 500 мл;
    • лизоцим, 4×0,5 мл, 50 мг/мл;
    • бензонуклеаза, 4×0,5 мл, 10000 ед/мл;

Условия хранения:
20хбуфер — при комнатной температуре или при +4 °С.
Лизоцим и бензонуклеаза при -20 °С.

Набор для экстракции бактериального белка (НЭББ), инструкция по применению, Диаэм, русск., 2 стр.
90078
38 363,=
483,= USD
Набор для экстракции бактериального белка B-PER обеспечивает мягкую экстракцию белков из бактерий (E. coli) без необходимости механического повреждения клеток. Набор может быть использован для выделения растворенных белков и телец включения из бактериальных клеточных лизатов. В состав набора входит реагент для экстракции бактериального белка B-PER, лизоцим и ДНКаза I, что позволяет выделять белки большого молекулярного веса (более 70 кДа) и белки экспрессирующиеся в тельцах включения. В зависимости от применения, добавочные компоненты: ингибиторы протеаз, соли, восстанавливающие агенты могут быть добавлены к реагенту.

Важная информация о продукте:

  • B-PER экстрагирует белки из свежих и замороженных клеток. Обычно экстракция более эффективна из замороженных клеток. Количество реагента зависит от количества клеточной пасты. Если необходимо, добавьте ингибиторы протеаз не содержащие ЭДТА, соли, и восстанавливающие агенты прямо в реагент.
  • добавьте лизоцим и ДНКазу I к B-PER реагенту для более эффективной экстракции белка. Экстракция некоторых сверхэкспрессированных белков не требует добавления лизоцима;
  • если добавление лизоцима и ДНКазы I может помешать последующему применению, использование этих ферментов следует исключить;
  • реагент B-PER эффективно экстрагирует растворимые белки из распространенных бактериальных штаммов и особенно подходит для штаммов BL21 с дефектной протеазной экспрессией. Если лизис клеток проходит неэффективно для определенного бактериального штамма, заморозьте клетки перед экстракцией;
  • лизаты цельных клеток, приготовленные с помощью реагента B-PER, совместимы с последующими приложениями, такими как количественное определение белка методом BCA или методом Брэдфорда.

Протокол экстракции белка из бактериальных клеток:

  • осадите бактериальные клетки центрифугированием при 5000 g в течении 10 минут;
  • если необходимо, добавьте 2 мкл лизоцима и 2 мкл ДНКазы I на 1 мл реагента B-PER. Добавьте ингибитор протеаз не содержащий ЭДТА;
  • добавьте 4 мл реагента B-PER на каждый грамм осадка клеток. Суспендируйте пипетированием;
  • инкубируйте 10-15 минут при комнатной температуре;
  • центрифугируйте лизат при 15000 g в течении 5 минут для отделения растворимых и нерастворимых белков.

Примечание: Если огромное количество сверхэкспрессированного белка остается в осадке, выделяемый белок может экспрессироваться в тельцах включения. В этом случае, либо используйте реагент для очистки телец включений (арт. 78115), либо измените условия экспрессии белка для минимизации образования телец включения.

Проблемы при выделении, причины и решения:

Проблема

Возможная причина

Решение

Выделяемый белок не растворяется

Выделяемый белок экспрессируется в тельцах включения

Измените условия экспрессии белка или используйте реагент для солюбилизации телец включения.

Добавьте лизоцим и ДНКазу I к реагенту B-PER

Бактериальные клетки не лизируются при добавлении фермента

Температура слишком низкая

Подогрейте клеточную культуру и остальные реагенты до комнатной температуры

Лизоцим имеет низкую активность или неактивен

Добавьте больше лизоцима к B-PER реагенту или купите новый фермент.

Высокая вязкость клеточного экстракта

ДНКаза I имеет низкую активность или неактивна

Добавьте больше ДНКазы I к B-PER реагенту или купите новый фермент.

Добавьте Mg2+ до конечной концентрации 2 mM

Сверхэкспрессированный белок остается в осадке

Только реагент B-PER не может перевести белок в растворенное состояние

Добавьте лизоцим и ДНКазу I к B-PER

Реагент B-PER мутный после доставки

Реагент холодный

Нагрейте реагент до комнатной температуры

Состав набора B-PER:

  • B-PER реагент для экстракции бактериального белка, 250 мл;
  • лизоцим, 0.5 мл 50мг/мл;
  • ДНКаза I, 0.5 мл, 2500 ед/мл.

Сопутствующие товары Thermo Scientific:

  • 78990 Реагент для экстракции белка из дрожжей Y-PER, Thermo FS;
  • 89802 Реагент для экстракции белка из клеток насекомых I-PER, Thermo FS;
  • 78505 Реагент для экстракции белка из культивируемых клеток млекопитающих M-PER, Thermo FS;
  • 78510 Реагент для экстракции белка из тканей T-PER, Thermo FS;
  • A44056 Реагент для экстракции суммарного белка из растений Pierce Plant, Thermo FS;
  • 89802 Реагент для экстракции белка из насекомых I-PER, Thermo FS;
  • 78115 Реагент для очистки телец включений, Thermo FS.

Информацию о данной продукции можно получить по запросу.
  • Набор для экстракции бактериального белка B-PER, Thermo FS
См. также:

Бензонуклеаза – фермент гидролизующий все примеси нуклеиновых кислот

Гомогенизаторы FastPrep

Среды микробиологические

Среды для молекулярной биологии

Хромотография белков

Электрофорез белков

Маркеры молекулярного веса белков, контроли

Ваш заказ будет обработан
в ближайшее время.
Мы пришлем уведомление, как только все будет готово. Спасибо!