Проточные цитометры: анализаторы и сортеры

Набор для сепарации клеток CD3+ мышей используется для быстрого и легкого выделения клеток CD3+ из суспензий клеток селезенки, тимуса, лимфатических узлов или мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) мышей.

Принцип действия

Меченые CD3+ клетки получают добавлением соответствующего количества антител и магнитных частиц (beads) в суспензию клеток методом магнитной адсорбции на колонках. Сепарированные клетки могут быть использованы для последующих экспериментов, таких как культивирование клеток, проточная цитометрия и т.д.

Компоненты набора:

• антитела anti mouse CD3 biotin antibody, 1 мл;
• магнитные микрочастицы со стрептавидином (Streptavidin MicroBeads), 1 мл.

Условия хранения:

• доставка при температуре от 2 до 8 °C;
• хранить в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°C, не замораживать;
• срок годности 12 месяцев.

Набор сепарации клеток CD3 + человека используется для быстрого и легкого отделения клеток CD3 + в суспензии клеток периферической крови человека (PBMC), тимуса, лимфатических узлов или других тканей.

Принцип действия

Компоненты набора:

• антитела anti-human CD3 biotin antibody, 1 мл;
• магнитные микрочастицы со стрептавидином (Streptavidin MicroBeads), 1 мл.

Условия хранения:

• доставка при температуре от 2 до 8 °C;
• хранить в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°C, не замораживать;
• срок годности 12 месяцев.

Набор для сепарации клеток CD4+ мышей используется для быстрого и легкого выделения клеток CD4+ из суспензий клеток селезенки, тимуса, лимфатических узлов или мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) мышей.

Принцип действия

Меченые CD4+ клетки получают добавлением соответствующего количества антител и магнитных частиц (beads) в суспензию клеток методом магнитной адсорбции на колонках. Сепарированные клетки могут быть использованы для последующих экспериментов, таких как культивирование клеток, проточная цитометрия и т.д.

Компоненты набора:

• антитела anti mouse CD4 biotin antibody, 1 мл;
• магнитные микрочастицы со стрептавидином (Streptavidin MicroBeads), 1 мл.

Условия хранения:

• доставка при температуре от 2 до 8 °C;
• хранить в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°C, не замораживать;
• срок годности 12 месяцев.

Набор сепарации клеток CD4 + человека используется для быстрого и легкого отделения клеток CD3 + в суспензии клеток периферической крови человека (PBMC), тимуса, лимфатических узлов или других тканей.

Принцип действия

Компоненты набора:

• антитела anti-human CD4 biotin antibody, 1 мл;
• магнитные микрочастицы со стрептавидином (Streptavidin MicroBeads), 1 мл.

Условия хранения:

• доставка при температуре от 2 до 8 °C;
• хранить в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°C, не замораживать;
• срок годности 12 месяцев.

Набор для сепарации клеток CD8+ мышей используется для быстрого и легкого выделения клеток CD8+ из суспензий отдельных клеток селезенки, тимуса, лимфатических узлов или мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) мышей.

Принцип действия

Меченые CD8+ клетки получают добавлением соответствующего количества антител и магнитных частиц (beads) в суспензию клеток методом магнитной адсорбции на колонках. Сепарированные клетки могут быть использованы для последующих экспериментов, таких как культивирование клеток, проточная цитометрия и т.д.

Компоненты набора:

• антитела anti mouse CD8 biotin antibody, 1 мл;
• магнитные микрочастицы со стрептавидином (Streptavidin MicroBeads), 1 мл.

Условия хранения:

• доставка при температуре от 2 до 8 °C;
• хранить в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°C, не замораживать;
• срок годности 12 месяцев.

Набор сепарации клеток CD8 + человека используется для быстрого и легкого отделения клеток CD8 + в суспензии клеток периферической крови человека (PBMC), тимуса, лимфатических узлов или других тканей.

Принцип действия

Компоненты набора:

• антитела anti-human CD4 biotin antibody, 1 мл;
• магнитные микрочастицы со стрептавидином (Streptavidin MicroBeads), 1 мл.

Условия хранения:

• доставка при температуре от 2 до 8 °C;
• хранить в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°C, не замораживать;
• срок годности 12 месяцев.

Преимущества системы:

• компактность: можно поставить в любом месте;
• легкость и простота использования: готовые наборы реагентов c упрощенной пробоподготовкой;
• интуитивное управление: позволяет сделать работу максимально комфортной;
• программные модули адаптированы под наборы реагентов: простой анализ образцов;
• универсальность: два открытых программных модуля под реагенты пользователя;
• возможность обслуживания без участия сервисного инженера.

Технические характеристики

• Твердотельный зелёный диодный лазер — 532 нм, 20 мВт;
• параметры: прямое светорассеяние, два параметра флуоресценции;
• фильтры для детекции флуоресценции: 576/±28 (желтый), 680/±30нм (красный);
• CV, % — менее 10, стандартно менее 5;
• типы клеток: гомогенные или гетерогенные, адгезивные или суспензионные, первичные или клеточные линии;
• диапазон концентрации клеток, тыс. кл./мл — 10-500;
• размер клеток в диаметре, мкм — 2-60+;
• объём образца, мкл — 50-200+;
• формат загрузки образцов — пробирка (тип «эппендорф», 1,5 мл);
• 3 скорости пробоотбора — 7,2, 14,4 и 36 мкл/мин;
• кварцевая капиллярная ячейка 1,5 мм x 0,8 мм, внутренний диаметр канала — 100 мкм;
• прецизионная шприцевая помпа с шаговым двигателем для подачи образца;
• анализ: на самом анализаторе или внешнем компьютере (экспорт через USB pdf-отчетов, csv-файлов со статистикой, исходных данных в виде файлов fsc);
• габариты, Ш × Г × В, мм — 207 × 283 × 221;
• вес, кг — 5,9.

См. также: Заказ антител Abcam

Уникальная особенность Attune NxT — функция акустической фокусировки, позволяющей проводить измерения с высокой скоростью без потери качества, сохраняя низкую вариабельность.

Возможности Attune NXT при анализе плоидности

• Высокая скорость измерения с сохранением низких значений коэффициента вариации;
• возможность использовать готовые реагенты Thermo FS для окраски ядер или использовать реагенты сторонних производителей;
• отработанные протоколы для разных задач в анализе плоидности;
• классический анализ плоидности при помощи голубого лазера (488 нм) и йодистого пропидия;
• возможность установки дополнительных лазеров (можно докупать после покупки прибора);
• легкая замена фильтров при необходимости их оптимизации;
• возможность использовать опциональный автосэмплер и роботизированную подачу для автоматической смены образцов и ускорения производительности;
• универсальность — при необходимости прибор можно использовать и для других задач в области проточной цитометрии.

Технические характеристики Attune NXT

• Лазеры — 1 (488 нм, 50 мВт), возможен апгрейд на рабочем месте пользователя до 4х-лазерной конфигурации;
• профиль лазера: 10×50 мкм, с плоской вершиной;
• каналы детекции — FSC¹, SSC², 4 флуоресцентных (до 14 флуоресцентных параметров при покупке дополнительных лазеров);
• чувствительность MESF³ — ≤ 80 MESF for FITC, ≤ 30 MESF for PE;
• формат загрузки — пробирки размерами от 17 x 100 мм до 8,5 x 45 мм (включая стандартные пробирки на 1,5, 2 и 5 мл), опциональный автозагрузчик для 96- и 384-луночных планшетов;
• скорость потока — 12,5-1000 мкл/мин;
• скорость сбора данных — до 65 000 событий/сек;
• метод определения концентрации частиц — прямой подсчет;
• габариты, Ш × Г × В — 400 × 580 × 430 мм;
• вес — 29 кг.

Примеры статей с использованием проточного цитофлуориметра Attune NxT

1) An Advanced Protocol for the Quantification of Marine Sediment Viruses via Flow Cytometry Mara Elena Heinrichs, Daniele De Corte, Bert Engelen and Donald Pan.
Разработка протоколов для подсчета вирусных частиц с помощью проточной цитометрии Attune NxT в морских донных отложениях. doi.org/10.3390/v13010102.

2) Control of Multigene Expression Stoichiometry in Mammalian Cells Using Synthetic PromotersYash D. Patel,Adam J. Brown, Jie Zhu, Guglielmo Rosignoli, Suzanne J. Gibson, Diane Hatton, David C. James.
Использование Attune NxT для контроля стехиометрии мультигенной экспрессии, с использованием синтетических промоторов в клетках млекопитающих. doi: 10.1021/acssynbio.0c00643.

3) Immunomodulatory Responses of Two Synthetic Peptides against Salmonella Typhimurium Infection. Marco Antonio Ibarra-Valencia, Gerardo Pável Espino-Solis, Blanca Elisa Estrada and Gerardo Corzo.
Иммуномодулирующий потенциал синтетических антимикробных пептидов оценивали путем определения профилей экспрессии цитокинов с помощью проточного цитометра Attune NxT. doi: 10.3390/molecules26185573.

4) ATP13A3 is a major component of the enigmatic mammalian polyamine transport system. Norin Nabil Hamouda, Chris Van den Haute, Roeland Vanhoutte, Ragna Sannerud, Mujahid Azfar, Rupert Mayer, Álvaro Cortés Calabuig, Johannes V Swinnen, Patrizia Agostinis, Veerle Baekelandt, Wim Annaert, Francis Impens, Steven H L Verhelst, Jan Eggermont, Shaun Martin, Peter Vangheluwe.
Attune NxT использовался для изучения новых компонентов системы транспорта полиаминов через мембрану у млекопитающих. doi: 10.1074/jbc.RA120.013908.

5) Microengineered perfusable 3D-bioprinted glioblastoma model for in vivo mimicry of tumor microenvironment. Lena Neufeld¹, Eilam Yeini¹, Noa Reisman¹, Yael Shtilerman¹, Dikla Ben-Shushan¹, Sabina Pozzi¹, Asaf Madi², Galia Tiram¹, Anat Eldar-Boock¹, Shiran Ferber¹, Rachel Grossman³, Zvi Ram³, Ronit Satchi-Fainaro¹ ⁴ *.

В лабораторных исследованиях многие лекарственный препараты показывают многообещающие результаты, но в конечном итоге не проходят клинические испытания. Современные модели рака неадекватны и это основная проблема. У большинства моделей отсутствует взаимодействие опухоль – строма, для правильного представления комплексной биологии рака. Гетерогенное микроокружение фибриновой глиобластомы, состоящей из клеток глиобластомы, астроцитов и микроглии, воспроизвели материалом полученным от пациентов. 3D-модель может стать основой для быстрого, воспроизводимого и надежного обнаружения цели, персонализированный скрининг, разработка лекарств, и потенциально заменить клеточные культуры и модели животных, в качестве мощной платформы.

Проточний цитофлуоримета Attune NxT использовался для оценки экспрессии Р-селектина в клетках, выращенных в 2D-культуре (2D culture) и в фибрине – 3D-бионик (fibrin 3D-bioink). С помощью проточного цитофлуориметра Attune NxT показан высокие уровни экспрессии P-селектина на клетках PD-GB4, выращенных в фибрине – 3D-бионик по сравнению с 2D культурой. doi: 10.1126/sciadv.abi9119.

Простой, удобный в работе проточный цитофлуориметр 7S, от китайской компании BioSino, способен обеспечить до 95% потребностей клеточной лаборатории в области клеточного анализа. Прибор имеет один синий лазер (488 нм), но, несмотря на это, обеспечивает до 7 каналов флуоресцентной детекции и обладает высокой чувствительностью детекции и простым ПО, что делает получение результатов быстрым и максимально комфортным.

7S позволяет реализовать все базовые методы цитометрии в лаборатории: анализ клеточного апоптоза и аутофагии, оценка эффективности трансфекции и уровня экспрессии, изучить фенотипы и субпопуляции лимфоцитов, провести HLA-типирование или анализ индекса фрагментации ДНК спермы человека, а также изучить плоидность растений.

Цитофлуориметр 7S оснащен синим аргоновым лазером 488 нм (50 мВт) и системой детекции из 7 сверхчувствительных светодиодных детекторов, которые регистрируют 5 флуоресцентных сигналов, а также прямое (FSC*) и боковое светорассеяния (SSC**).

Система детекции позволяет работать как с самыми популярными красителями (FITC, Alexa 488, PE, PI), так и тандемными красителями (PE-Texas Red, PE-Cy5, PE-Cy5.5, PE-Cy7), что позволяет реализовать простые мультиплексные эксперименты.

Демонстрация прибора

Прибор имеется на складе, есть возможность запросить демонстрацию на рабочем месте заказчика. Форма заказа доступна по кнопке «Заказать демо».

Технические характеристики цитофлуориметра 7S

• Автоматический забор проб с функцией автоматического промешивания;
• ПО на английском языке;
• сбор данных / компенсация флуоресценции в 1 клик;
• метод определения концентрации клеток – прямой подсчет;
• источник возбуждения – синий лазер 488 нм;
• каналы детекции:
  • FL1 – 525/50 нм (FITC/Alexa 488);
  • FL2 – 585/40 нм (PE);
  • FL3 – 630/30 нм (PE-Texas Red/ECD/PI);
  • FL4 – 697/60 нм (PerCP /PE-Cy5 / PE-Cy5.5);
  • FL5 – 780/60 нм (PE-Cy7);
• FSC* чувствительность, мкм – менее 1;
• минимальный объем образца, мкл – 90;
• чувствительность, MESF*** – не более 150 (по FITC) и не более 50 (по PE);
• коэффициенты вариации (CV) для всех каналов, % – менее 2;
• размер клеток/частиц, мкм – от 0,5 до 50;
• габариты, Ш × Г × В, см — 500 х 605 х 305;
• вес, кг – 35.

* FSC (Forward Scatter) – прямое светорассеивание.
** SSC (Side Scatter) – боковое светорассеивание.
***MESF (Molecules of Equivalent Soluble Fluorochrome) – число молекул указанного эквивалентного растворимого флуорохрома.

См. также:

Проточный цитофлуориметр, до 5 лазеров, до 27 флуоресцентных каналов, ZE5, Bio-Rad

Сортер клеток, до 3 лазеров, до 4 флуоресцентных параметров, S3e, Bio-Rad

Антитела

Центрифуги

Диссоциатор клеточный DSC-400, RWD, Китай

Особенность всех проточных цитофлуориметров серии Guava easyCyte – проточная ячейка на основе запатентованной микрокапиллярной технологии. Использование микрокапиллярных взаимодействий для выравнивания клеток в потоке позволило отказаться от обжимающей жидкости и снизить количество отходов (до 50 мл за 8 часов работы).

Интуитивное программное обеспечение собирает и анализирует данные с помощью готовых программных модулей либо на основе настроек, самостоятельно оптимизированных пользователем для решения исследовательских задач.

Проточные цитометры Guava easyCyte компактны, экономичны и просты в работе и обслуживании. Микрокапиллярная проточная ячейка построена на основе кварцевого капилляра квадратного сечения со стороной 100 мкм, пригодна для работы с разным типом клеток, ее обслуживание (в том числе при забивке) проводится пользователем и не требует вызова сервисного инженера. Существуют конфигурации с разным набором лазеров и детекторов, с загрузкой из одиночных пробирок (конфиг. SL) и/или из 96-луночных планшетов (конфиг. HT). В целом, это простой, надежный и недорогой прибор для решения разного типа задач.

Технические характеристики:

• твердотельные полупроводниковые лазеры, до 3 лазеров из списка: 405, 488, 532 и 642 нм;
• регистрация до 14 параметров: 2 детектора светорассеяния и до 12 каналов флуоресценции;
• минимальный объем образца — 100 мкл для лунок планшета, 150 мкл для пробирок объемом 0,5 мл, 900 мкл для пробирок объемом 1,5 мл;
• диапазон концентрации клеток, тыс. кл./мл — 10-500;
• скорость: 7-70 мкл/мин, 10-1000 событий в секунду;
• точность: коэффициент вариации менее 4% (определен по ядрам эритроцитов курицы);
• размер клеток/частиц, мкм: 0,2 – 60;
• количество отходов: 50 мл за 8 часов работы;
• формат загрузки образцов — пробирка «эппендорф» объемом 1,5 мл (SL), 96-луночные планшеты и пробирки «эппендорф» объемом 0,5/1,5 мл (HT);
• габариты, Ш × Г × В, см — 61 × 45 × 24 (SL), 61 × 51 × 25 (HT);
• вес, кг — 15,9 (SL), 31,8 (HT).

Конфигурации Guava EasyCyte:

См. также: Заказ антител Abcam

Проточный цитометр SinoCyte от BioSino представляет собой высокопроизводительную, компактную и удобную в использовании систему с поддержкой до трех каналов и 18 параметров флуоресценции. Благодаря широкому спектру применения проточный цитометр SinoCyt является мощным инструментом для исследователей в различных областях, включая онкологию, иммунологию, исследования стволовых клеток, клеточную биологию, океанографию, мониторинг окружающей среды и клиническую диагностику.

Области применения

• Онкология и гематология: анализ клеток крови, обнаружение дендритных клеток, цитотоксических Т-клеток, Т-клеточных рецепторов и Р-селектина.
• Иммунология: обнаружение пролиферирующих Т-клеток, изотипов иммуноглобулинов, NK-клеток и регуляторных Т-клеток.
• Стволовые клетки: анализ гемопоэтических стволовых клеток, обнаружение CAR-T-клеток и анализ мезенхимальных стромальных клеток
• Клеточная биология: клеточная пролиферация, клеточный цикл и анализ апоптоза.
• Океанография: обнаружение морских микроорганизмов, количественный анализ ДНК и определение содержания липосом в морских водорослях.
• Мониторинг окружающей среды: обнаружение живых и мертвых бактерий, абсолютное количественное определение вирусов, бактерий и микроводорослей, выявление бактериальной плоидности и классификация микроводорослей.
• Клиническая диагностика: анализ субпопуляций лимфоцитов, нейтрофилов регуляторных Т-клеток, активация Т-клеток, определение блокирующих антител, определение цитокинов, подсчет гемопоэтических стволовых клеток, иммунофенотипирование лимфом, анализ клеточного цикла и полиплоидии, выявление очагов лейкемии.

Технические характеристики

• Лазеры — до 3х одновременно из 3 доступных: 405 нм (100 мВт), 488 нм (60 мВт), 637 нм (80 мВт);
• каналы детекции:
• 488 лазер: FSC, SSC, 525 нм, 575 нм, 620 нм, 697 нм, 780 нм (7 параметров);
• 638 лазер: 670 нм, 720 нм, 780 нм (3 параметра);
• 405 лазер: 425 нм, 460 нм, 525 нм, 605 нм, 660 нм, 720 нм, 780 нм, VSC 8 параметров), VSC (Violet side scater);
• чувствительность, MESF¹ — FITC < 100; PE < 50; APC < 50;
• формат загрузки — пробирки размерами от 17 x 100 мм до 8,5 x 45 мм (включая стандартные пробирки на 1,5, 2 и 5 мл), опциональный автозагрузчик для 40- и 96-луночных планшетов;
• размер частиц от 0,2 до 50 мкм;
• скорость сбора данных, события / с — до 50000;
• скорость потока, мкл / сек — 15-120;
• метод определения концентрации клеток — прямой подсчет;
• габариты, Ш × Г × В — 760 × 450 × 470 мм;
• вес, кг — 40.

• нажмите на точку в любом плоте данных, чтобы увидеть соответствующее изображение;
• кликните на интервал на любой гистограмме, чтобы увидеть каждую клетку в этом интервале;
• нарисуйте гейты на дот-плотах и вы увидите результирующие популяции клеток для валидации результатов.

• Применим в любой научно-исследовательской дисциплине;
• детекция с использованием высокочувствительной камеры Hamamatsu, что позволяет драматически улучшить разрешение по отношению к традиционным проточным цитометрам;
• сконфигурирован для задач лабораторий любого фокуса и бюджета;
• характеризует популяции практически по любому визуальному или флуоресцентному параметру;
• лазеры — до 4-х:
• стандартно — 488 нм;
• опция — 405, 561, 642 нм;
• до 12 каналов детекции;
• опциональный автосэмплер для 96-луночных планшетов;
• увеличение 20Х (стандарт).

Уникальная особенность Attune NxT — функция акустической фокусировки, позволяющей проводить измерения с высокой скоростью без потери качества, сохраняя низкую вариабельность.

Возможности технологии акустической фокусировки

• Высокая скорость анализа при минимальном расходе реагентов;
• высокая точность и минимальная вариабельность данных;
• быстрый анализ без потери чувствительности;
• детекция редких событий в количестве, достаточном для статистической обработки;
• окраска антителами без необходимости отмывки.

Технические характеристики

• Лазеры — до 4х одновременно из 5 доступных: 405 нм (50 мВт), 488 нм (50 мВт), 532 (100 мВт), 561 нм (50 мВт), 637 нм (100 мВт);
• профиль лазеров: 10×50 мкм, с плоской вершиной;
• каналы детекции — FSC¹, SSC², до 14 флуоресцентных, опциональный дополнительный параметр SSC на фиолетовом лазере (405 нм);
• чувствительность MESF³ — ≤ 80 MESF for FITC, ≤ 30 MESF for PE, ≤70 MESF for APC;
• формат загрузки — пробирки размерами от 17 x 100 мм до 8,5 x 45 мм (включая стандартные пробирки на 1,5, 2 и 5 мл), опциональный автозагрузчик для 96- и 384-луночных планшетов;
• скорость потока — 12,5-1000 мкл/мин;
• скорость сбора данных — до 65 000 клеток/сек;
• метод определения концентрации клеток — прямой подсчет;
• габариты, Ш × Г × В — 400 × 580 × 430 мм;
• вес — 29 кг.

Примеры статей с использованием проточного цитофлуориметра Attune NxT

1) An Advanced Protocol for the Quantification of Marine Sediment Viruses via Flow Cytometry Mara Elena Heinrichs, Daniele De Corte, Bert Engelen and Donald Pan.
Разработка протоколов для подсчета вирусных частиц с помощью проточной цитометрии Attune NxT в морских донных отложениях. doi.org/10.3390/v13010102.

2) Control of Multigene Expression Stoichiometry in Mammalian Cells Using Synthetic PromotersYash D. Patel,Adam J. Brown, Jie Zhu, Guglielmo Rosignoli, Suzanne J. Gibson, Diane Hatton, David C. James.
Использование Attune NxT для контроля стехиометрии мультигенной экспрессии, с использованием синтетических промоторов в клетках млекопитающих. doi: 10.1021/acssynbio.0c00643.

3) Immunomodulatory Responses of Two Synthetic Peptides against Salmonella Typhimurium Infection. Marco Antonio Ibarra-Valencia, Gerardo Pável Espino-Solis, Blanca Elisa Estrada and Gerardo Corzo.
Иммуномодулирующий потенциал синтетических антимикробных пептидов оценивали путем определения профилей экспрессии цитокинов с помощью проточного цитометра Attune NxT. doi: 10.3390/molecules26185573.

4) ATP13A3 is a major component of the enigmatic mammalian polyamine transport system. Norin Nabil Hamouda, Chris Van den Haute, Roeland Vanhoutte, Ragna Sannerud, Mujahid Azfar, Rupert Mayer, Álvaro Cortés Calabuig, Johannes V Swinnen, Patrizia Agostinis, Veerle Baekelandt, Wim Annaert, Francis Impens, Steven H L Verhelst, Jan Eggermont, Shaun Martin, Peter Vangheluwe.
Attune NxT использовался для изучения новых компонентов системы транспорта полиаминов через мембрану у млекопитающих. doi: 10.1074/jbc.RA120.013908.

5) Microengineered perfusable 3D-bioprinted glioblastoma model for in vivo mimicry of tumor microenvironment. Lena Neufeld¹, Eilam Yeini¹, Noa Reisman¹, Yael Shtilerman¹, Dikla Ben-Shushan¹, Sabina Pozzi¹, Asaf Madi², Galia Tiram¹, Anat Eldar-Boock¹, Shiran Ferber¹, Rachel Grossman³, Zvi Ram³, Ronit Satchi-Fainaro¹ ⁴ *.

В лабораторных исследованиях многие лекарственный препараты показывают многообещающие результаты, но в конечном итоге не проходят клинические испытания. Современные модели рака неадекватны и это основная проблема. У большинства моделей отсутствует взаимодействие опухоль – строма, для правильного представления комплексной биологии рака. Гетерогенное микроокружение фибриновой глиобластомы, состоящей из клеток глиобластомы, астроцитов и микроглии, воспроизвели материалом полученным от пациентов. 3D-модель может стать основой для быстрого, воспроизводимого и надежного обнаружения цели, персонализированный скрининг, разработка лекарств, и потенциально заменить клеточные культуры и модели животных, в качестве мощной платформы.

Проточний цитофлуоримета Attune NxT использовался для оценки экспрессии Р-селектина в клетках, выращенных в 2D-культуре (2D culture) и в фибрине – 3D-бионик (fibrin 3D-bioink). С помощью проточного цитофлуориметра Attune NxT показан высокие уровни экспрессии P-селектина на клетках PD-GB4, выращенных в фибрине – 3D-бионик по сравнению с 2D культурой. doi: 10.1126/sciadv.abi9119.

Проточный цитометр Attune CytPix для широкого спектра задач – компактный, простой, удобный в использовании.

С помощью изображений полученных Attune CytPix можно оценит морфологию клеток, отслеживать контаминацию, показать межклеточные взаимодействия, морфологические характеристики апоптотических клеток и убедиться, что через луч лазера проходит отдельная клетка, а не конгломераты, их обломки или мусор, а так же можно просматривать и группировать изображения.

Уникальные особенности проточного цитометра Attune CytPix

• Возможность протокола анализа без лизиса и отмывок для минимизации потери клеток, и экономии время, а также упрощение подготовки;
• снижение времени пробоподготовки на 65%;
• характеристика клеточных популяций;
• стабильное качество изображения при высокой скорости потока;
• описание морфологии апоптотических клеток;
• исследование межклеточных взаимодействий;
• контроль качества клеточных культур, отслеживание контаминации;
• просмотр и группировка изображений, а также определение типов клеток;
• визуализация для подтверждения и настройки гейта, включая только отдельные клетки, представляющие интерес;
• система очистки, которая механически уменьшает возникновение засорения.

Протоколы подготовки образцов.

Примеры использования проточного цитометр Attune CytPix

Рисунок 1. Ядра эритроцитов курицы (CEN) склонны слипаться в дублеты или другие агрегаты. Стратегия гейтирования слипшихся ядер эритроцитов курицы с Attune CytPix.

Рисунок 2. С помощью проточного цитометра Attune CytPix можно просматривать и группировать изображения, а также определять типы клеток E. coli на основе их морфологических характеристик. В течении роста клетки E. coli, развиваются в два типа колониеобразующих клеток - короткие, которые напоминают отдельные клетки, и удлиненные структуры.

Рисунок 3. Отслеживание контаминации критически важно для анализа клеточных линий. На пример, перед трансплантацией клеток Вы можете их проверить на контаминацию с помощью Attune CytPix.

Рисунок 4. Визуализация Attune CytPix показывает межклеточные взаимодействия на примере CAR T-клеток, нацеленных на клетки лимфомы.

Рисунок 5. Анализ апоптоза клеток (с использованием аннексина V и PI) дополняется изображениями с выявленным морфологическим особенностями каждой клетки. Морфологические характеристики апоптотических клеточных популяции, полученные проточным цитометром Attune CytPix.

Особые преимущества проточного цитометра с визуализацией Attune CytPix

• Программное обеспечение и камера проточного цитометра Attune CytPix гарантируют, что события, которые анализируются, являются отдельными клетками, а не дублетами, скоплениями, обломками клеток или мусором.
• Акустическая фокусировка в 10 раз быстрее любой другой в проточном цитометре Attune CytPix.

Гидродинамическая фокусировка обеспечивает точное позиционирование клеток по центральной оси, позволяя клеткам быть сосредоточенными на точку лазерного луча и совместно с высокоскоростной камерой обеспечивает качественную картинку (Рисунок 6).

Проточный цитометр Attune CytPix с высокоскоростной камерой имеет большое значение для исследования в области клеточной биологии, генной терапии и оптимизации их протоколов.

Рисунок 6. Акустическая фокусировка в сравнении с традиционной гидродинамической фокусировкой.

Рисунок 7. Стабильное качество изображения при высокой скорости потока 12,5 мик/мин, 25 мик/мин, 100 мик/мин, 200 мик/мин, 500 мик/мин и 1000 мик/мин. Нет изменений в частоте визуализации и получению картин. Простая настройка фокуса и камеры для получения качественного изображения.

Технические характеристики проточного цитометра Attune CytPix

• Количество лазеров – 2/4;
• каналы детекции – канал прямого и бокового светорассеяния и 14 флуоресцентных каналов;
• освещение изображения – 405 нм лазер с менее 50 наносекундный импульс;
• акустическая фокусировка;
• чувствительность – ≤80 MESF for FITC, ≤30 MESF for PE, ≤70 MESF for APC;
• скорость анализа, событий/сек – более 35 тыс.;
• скорость фотографии, фото/сек – 6000;
• кратность увеличения – 20×;
• разрешение камеры, нм/Мп – 0,3;
• размер частиц, нм – до 800;
• статус использования – только для исследований;
• программное обеспечение – Invitrogen Attune 21 CFR Part 11;
• процессор – Nvidia Quadro P2200 GPU;
• жесткий диск – 2 x 8TB SSD, 2,5-inch Samsung 870 QVO, 560 MB/s;
• габариты, В × Ш × Г, см – 49 × 58 × 43.

Опции: автоподатчик Invitrogen CytKick Autosampler и робот подачи планшетов Orbitor RS2 Microplate Mover увеличат операционную мощность, уменьшат количество ошибок, связанных с человеческим фактором.

Рисунок 8. Дополнительные конфигурации увеличивают операционную мощность, уменьшают количество ошибок, связанных с человеческим фактором.
(A) Attune CytPix Flow Cytometer
(B) Invitrogen CytKick Autosampler
(C) Orbitor RS2 Microplate Mover

Таблица 1. Сравнение автосэмплеров Invitrogen CytKick и CytKick Max

Характеристика	Автосэмплер CytKick	Автосэмплер CytKick Max
Пропускная способность	42 мин для 96-луночного планшета в высокопропускном режиме	22 мин для 96-луночного планшета (в ускоренном режиме с одной промывкой, одного смешивания и полного анализа образца 20 мкл)
Совместимость	96-луночные глубоколуночные планшеты 96-луночные стандартные планшеты 384-луночные глубоколуночные планшеты 384-луночные стандартные планшеты	96-луночные глубоколуночные планшеты 96-луночные стандартные планшеты 384-луночные глубоколуночные планшеты 384-луночные стандартные планшеты 1,5 и 2 мл микроцентрифужные пробирки в шативе (до 24 мест) 96-луночные планшеты, запечатанные фольгой 384-луночные планшеты, запечатанные фольгой, дополнительные типы планшет

Таблица 2. Конфигурации цитометра Attune CytPix.

* - Число каналов детекции включает все каналы флюоресценции, а также каналы прямого и бокового рассеяния.

Таблица 3. Конфигурация лазеров, количество каналов детекции в сравнении Attune CytPix с Attune NxT

* - Число каналов детекции включает все каналы флюоресценции, а также каналы прямого и бокового рассеяния.

Выбрать можно конфигурацию прибора, соответствующую вашим потребности. Проточный цитометр Attune CytPix доступен в конфигурациях с 2–4 лазерами с визуализацией в светлом поле, а проточный цитометр Attun NxT доступен с 1–4 лазерами без визуализации.

Таблица 4. Выбор красителей для определения жизнеспособности клеток

Проточный цитофлуориметр ZE5 — надежный, гибкий, высокопроизводительный анализатор для лабораторий с большим потоком образцов.

Уникальные особенности проточного цитофлуориметра ZE5, Bio-Rad

Цитофлуориметр ZE5 имеет до пяти лазеров и 30 детекторов, позволяет работать с любой вашей панелью; переключается между пробирками, штативами или планшетами без изменения конфигурации программного обеспечения; проводит автоматическую проверку всех фильтров на предмет их наличия и правильного расположения.

Цитофлуориметр ZE5 обеспечивает высокопроизводительный скрининг отдельных клеток, эффективный скрининг процессов передачи белков, мониторинг пациентов, проходящих иммунотерапию. Кроме исследований иммуногенности, разработки вакцины, открытия фенотипических лекарств, скрининга терапевтических антител, открытие биомаркеров рака, также может проводить работу по исследованию наночастиц.

В ситуации пандемии коронавируса облегчает скрининг сывороточных антител, реактивных к антигенам SARS-CoV-2.

Возможности цитофлуориметра ZE5:

• большое количество анализируемых параметров (до 30) обеспечивают гибкость в работе;
• высокая скорость анализа (до 100 000 событий в секунду, < 8 мин на 96-луночный планшет) обеспечивает высокую производительность;
• конструкция оптической системы (одинаковое расстояние от проточной ячейки до каждого детектора), фотоумножители Hamamatsu H11903 обеспечивают высокую чувствительность и разрешение;
• увеличенная стабильность лазерного пучка, верифицирование оптической системы ZE5 EYE обеспечивают стабильность и надежность результатов;
• возможность прямого подключения внешнего источника деионизированной воды и слива, замена емкостей с сервисными растворами без остановки измерения, автоматические процедуры старта и выключения обеспечивают удобство в обслуживании;
• универсальный автоматический автозагрузчик для любого типа пробирок или планшетов, контроль температуры, переноса пробы, предотвращение повреждения пробозаборника;
• возврат неиспользованного образца;
• конструкция проточной ячейки, высокочувствительная электроника обеспечивают низкие CV даже при высокой скорости потока.

Технические характеристики цитофлуориметра ZE5:

• лазеры — до 5: 355 нм (50 мВт), 405 нм (100 мВт), 488 нм (100 мВт), 561 нм (50 мВт), 640 нм (100 мВт);
• каналы детекции — FSC¹, SSC², до 27 флуоресцентных, опциональный дополнительный детектор FSC для субмикронных частиц;
• чувствительность MESF³ — <100 для FITC, PE, APC;
• формат загрузки — универсальный автозагрузчик для пробирок и планшетов (до 384 лунок);
• скорость потока — 0,025-3,5 мкл/сек (1,5-210 мкл/мин);
• скорость сбора данных — до 100 000 клеток/сек;
• метод определения концентрации клеток — прямой подсчет;
• габариты, Ш × Г × В — 740 × 690 × 660 мм;
• вес — 110 кг.

Компактный, легкий в использовании проточный цитометр CytoFLEX для широкого спектра научных исследований.
Уникальная конструкция цитометра и конфигурации от 1 до 6 лазеров и от 4 до 21 флуоресцентных параметров обеспечивают поддержку большинства мультипараметрических приложений.

Компактные размеры, простое обслуживание, исключительные чувствительность, разрешение и надежность отличают CytoFLEX во всех его конфигурациях. Все это вместе со стабильной производительностью обеспечивает конкурентные преимущества CytoFLEX.
Запатентованный детекторный модуль на базе технологии спектрального мультиплексирования состоит из твердотельных, высокоэффективных фотодиодных детекторов с низким уровнем шума, что обеспечивает экстраординарное разрешение для получения более точных данных и лучшей регистрации редких событий.

Бренд CytoFLEX включает три серии приборов: CytoFLEX, CytoFLEX S и CytoFLEX LX, различающиеся по максимальному числу лазеров и количеству флуоресцентных параметров, позволяя подобрать прибор под любую исследовательскую задачу.

Технические характеристики цитометров CytoFLEX

• фиксированная встроенная оптика и кварцевая проточная ячейка
• непревзойденная чувствительность лавинных фотодиодов: FITC < 30 MESF, PE < 10 MESF
• абсолютная линейность детекторов обуславливает новые подходы к компенсации
• FITC: < 30 MESF (молекул эквивалентного растворимого флуорохрома)
• PE: < 10 MESF
• Разрешение частиц < 200 нм с помощью дополнительного параметра бокового светорассеяния на фиолетовом лазере (VSSC)
• габариты, Ш х Г х В, см — 42,5 x 42,5 x 34;
• вес, кг — 23,4.

Характеристики цитометров серии CytoFLEX

• широкий спектр конфигураций: от 1 лазера и 4 флуоресцентных параметров до 3 лазеров и 13 флуоресцентных параметров
• до 5 каналов синего лазера (488 нм), до 3 каналов красного лазера (638 нм) и до 5 каналов фиолетового лазера (405 нм)
• 13 переставляемых полосовых оптических фильтров

Характеристики цитометров серии CytoFLEX S

Цитометры серии CytoFLEX S отличаются следующими характеристиками:

• широкий спектр конфигураций: от 2 лазеров и 4 флуоресцентных параметров до 4 лазеров и 13 флуоресцентных параметров
• 13 переставляемых полосовых оптических фильтров

Характеристики цитометров серии CytoFLEX LX

Цитометры серии CytoFLEX LX отличаются следующими характеристиками:

• 2 конфигурации: 5 лазеров, 19 флуоресцентных параметров и 6 лазеров, 21 флуоресцентный параметр
• 3 канала синего лазера (488 нм), 3 канала красного лазера (638 нм), 5 каналов фиолетового лазера (405 нм), 5 каналов желто-зеленого лазера (561 нм), 3 канала лазера, излучающего ближний УФ (375 нм), и до 2 каналов ИК-лазера (808 нм)
• 21 переставляемый полосовой фильтр

Проточная цитометрия с функцией визуализации в потоке — это новое направление, сочетающее в себе не только возможности математического и статистического анализа клеток, но и микроскопию высокого разрешения каждой анализируемой клетки в потоке. Системы ImageStreamX MKII и FlowSight обеспечивают анализ большого количества изображений каждой клетки в потоке, включая светлопольный и темнопольный каналы (SSC) и до 10 флуоресцентных каналов на высокой скорости.

Комбинирование скорости, чувствительности и фенотипических возможностей проточной цитометрии с одной стороны и детализации изображений и функциональных возможностей
микроскопии с другой стороны, позволяют визуализирующим проточным цитометрам ImageStream и FlowSight обойти ограничения обоих методов и открывают двери для широкого
спектра новых приложений.

Цитометры FlowSight и ImageStreamX функционируют как обычные проточные цитометры, но также обеспечивают анализ изображений каждой клетки. Мощное и интуитивно понятное программное обеспечение позволяет беспрепятственно связывать количественные данные с изображениями:

• нажмите на точку в любом плоте данных, чтобы увидеть соответствующее изображение;
• кликните на интервал на любой гистограмме, чтобы увидеть каждую клетку в этом интервале;
• нарисуйте гейты на дот-плотах и вы увидите результирующие популяции клеток для валидации результатов.

Иннновационная технология цитометров Amnis увеличивает сигнал и уменьшает шум обеспечивая беспрецедентную фотонную чувствительность. Детали конфигурации, такие как специальный боковой скаттер-лазер, регулируемая интенсивность лазерного излучения и анализ светлопольных изображений для прямого анализа клеток позволяют системе более эффективно разделять клеточные популяции, чем при использовании более дорогих проточных цитометров. Простота в использовании, выдающаяся производительность и анализ изображений каждой клетки отвечают потребностям как новичков, так и экспертов в области проточной цитометрии.

• Анализирует тысячи клеток в секунду при 60X увеличении;
• простой пользовательский интерфейс с графиками и гейтированием в режиме реального времени;
• система может быть сконфигурирована с любым числом лазеров — от одного до семи;
• изменение увеличения микроскопа позволяет осуществлять анализ изображений как мелких частиц, так и очень больших клеток или даже их конгломератов.

• Лазеры – до 7:
• стандартно 488 нм;
• опция 375, 405, 561, 592, 642, 730 нм;
• стандартно 6 каналов флуоресценции высокого разрешения (до 12 каналов опционально);
• увеличение 40Х (стандарт) и 20Х, 60Х (опция);
• опциональный автосэмплер для 96-луночных планшетов.

• до 7 неколлинеарных лазеров,
• до 20 флуоресцентных каналов,
• возможность визуальной верификации результатов.

Уникальные возможности CellStream:

• запатентованная камера с уникальной технологией TDI для проточных цитометров Amnis;
• визуальное подтверждение результатов;
• высокие чувствительность и разрешение;
• анализ морфологических параметров: площадь, соотношение сторон, значение интенсивности самого яркого пикселя — наряду с данными по общей интенсивности;
• детекция и разделение субмикронных частиц;
• автоматические очистка и калибровка;
• автосэмплер для 96-луночного планшета уже в базовой комплектации;
• валидация по стандартам GMP.

Технические характеристики

• Максимально 7 лазеров, нм — 375, 405, 488, 532, 561, 642, 730 нм;
• мощность лазеров: 375 нм — 70 мВт, 405 нм — 175 мВт, 488 нм — 200 мВт, 532 нм — 150 мВт, 561 нм — 150 мВт, 642 нм — 150 мВт, 730 нм — 40 мВт;
• каналы детекции – FSC¹, SSC², до 20 флуоресцентных;
• чувствительность MESF³ — <10 FITC, <5 PE;
• разрешение по параметрам светорассеяния — FSC < 300 нм, SSC < 200 нм;
• коэффициент вариации (CV) — < 3% (определен по ядрам эритроцитов курицы);
• формат загрузки — 1 пробирка или 96-луночный планшет;
• скорость потока — 3.66 / 14.64 мкл/мин;
• скорость сбора данных — до 20 000 клеток/сек;
• метод определения концентрации клеток — прямой подсчет;
• габариты, Ш × Г × В — 440 × 625 × 495 мм.
  

Продукты для разделения клеток RWD включают в себя наборы для разделения клеток с магнитными микрошариками и колонки для разделения клеток, которые позволяют проводить сепарацию с высокой чистотой и высокой жизнеспособностью за счет простой работы. Наноразмерные магнитные шарики не требуют элюции, а разделенные клетки можно напрямую использовать в последующих экспериментах, таких как проточная цитометрия, культивирование клеток, секвенирование отдельных клеток и т.д.

Преимущества набора для магнитной сепарации RWD

• Эффективный и простой в использовании способ сепарации клеток;
• полученные клетки можно использовать для культивирования и секвенирования;
• сепарация не влияет на поверхностные рецепторы клеток;
• высокие показатели чистоты, жизнеспособности и выхода клеток.

Результаты пользователей

Стандартный протокол магнитной сепарации

Стартовый набор для магнитной сепарации включает в себя:

• 1 стенд для магнитной сепарации;
• 1 магнит для сепарации;
• 25 колонок.

RACS-Seq — это интегрированная система инструментов, которая объединяет профилирование метаболических явлений отдельных клеток, рамановскую сортировку клеток, подготовку образцов для секвенирования генома отдельных клеток и культивирования отдельных клеток. Благодаря технологии рамановской спектроскопии одиночных клеток с меченым стабильным изотопом субстратом, RACS-Seq позволяет проводить прямую классификацию видов микроорганизмов и измерение широкого спектра метаболических фенотипов (и их межклеточной гетерогенности) для отдельных клеток бескультивационным способом.

В RACS-Seq каждая отдельная клетка, отсортированная на основе ее метаболического феномена с помощью оптических пинцетов, может быть инкапсулирована в микрокаплю для амплификации ДНК/РНК одиночной клетки, что позволяет получать библиотеки нуклеиновых кислот одиночных клеток с высоким уровнем покрытия и низким уровнем систематической ошибки. Кроме того, с помощью этого прибора можно сортировать и культивировать отдельные бактериальные клетки в микрокаплях.

Особенности продукта RACS-Seq

• Быстрое многомерное фенотипическое профилирование метаболических явлений без маркировки:
• преимущество рамановской спектроскопии одиночных клеток состоит в том, что она не требует маркировки, не разрушает образец и позволяет быстро измерить метаболические фенотипы клеток, а также может быть дополнена секвенированием отдельных клеток. На основе рамановских спектров можно идентифицировать отдельные виды клеток, а также параллельно анализировать межклеточную гетерогенность и группы метаболических фенотипов по таким параметрам как метаболизм субстрата, синтез веществ, сети взаимодействия метаболитов, экологический стресс и межвидовые взаимодействия;
• точное, быстрое и легкое получение клеток-мишеней с сохранением их активности in situ:
• основанный на запатентованном чипе RAGE, RACS-Seq может легко контролировать траекторию движения отдельных клеток (диаметром> 0,5 мкм) целевых спектров рамановского рассеяния с помощью оптического пинцета, точно фиксировать их, а затем быстро экспортировать в микрокапли пиколитрового размера. Он обеспечивает сортировку отдельных функционально активных клеток на основе метаболических признаков по принципу «вы получаете то, что видите»;
• экстракция и амплификация одноклеточной ДНК/РНК с низким уровнем систематической ошибки и высоким охватом последовательностей:
• благодаря запатентованной технологии RAGE-Seq, RACS-Seq значительно снижает погрешность множественной амплификации смещения (MDA). Покрытие всей последовательности генома одной клетки E. coli может достигать более 90% (за счет амплификации пиколитровых количеств ДНК одиночных клеток в микрокаплях), что намного выше, чем в контрольной группе (23%; амплификация в микролитровых объёмах).

Технические параметры сортера RACS-Seq

Сортер клеток S3e от Bio-Rad — это инновационная система сортинга с классической системой гидродинамической фокусировки, предназначенная для решения научно-прикладных задач в области сортировки клеток, в зависимости от сигнала флуоресцентной метки. В приборе реализована инновационная технология ProDrop.

В проточном цитометре, оборудованном системой для сортировки клеток, проточная ячейка закреплена на пьезокристалле. При подаче на него напряжения кристалл вместе с ячейкой совершает колебания с заданной частотой, в результате чего струя жидкости с клетками разбивается на отдельные капли. Проходя сквозь заряжающее кольцо, капля может приобретать положительный или отрицательный заряд в зависимости от того, какая клетка содержится внутри капли. Пролетая мимо отклоняющих пластин, капля с клеткой притягивается к ним, выходит из основного потока и попадает в пробирку. Суть технологии ProDrop заключается в том, что после прохождения процедуры детекции и сортинга калибровочных частиц ProLine, несортированные частицы подвергаются вторичной детекции на выходе, что позволяет оценить, насколько успешно прошла процедура сортировки, и в автоматическом режиме внести коррекцию процедуры без вмешательства пользователя.

Технические характеристики сортера клеток S3e

• Уровень чувствительности, событий/сек — до 100000;
• частота сортировки, событий/сек — до 30000;
• точность сортировки, % — более 99;
• диаметр сопла, мкм — 100;
• направление сортировки — 2-х линейное;
• источник света — до 3 лазеров на выбор из 4 доступных (405, 488, 561, 640 нм);
• детекция в 4-х флуоресцентных каналах (525/30, 586/25, 615/25, 655 нм);
• чувствительность менее <125 MESF для красителей FITC и PE;
• сортировка до 5 пробирок по 5 мл каждого направления селекции,
• возможность сортировки в стрипованные пробирки и на предметные стекла
• для микроскопии;
• минимальное разрешение — 0,5 мкм;
• система охлаждения Пельтье, температурный диапазон, °C — от 4 до 37;
• габариты, ШхГхВ, см — 70×65×65.

Комплект поставки: сортер клеток S3e, лазерs 488 и 561 нм, 4 флуоресцентных детектора, калибровочный набор, контейнеры (2 шт.) для реагентов и отходов, соединительные трубки, ПО ProSort, кабель, ПК.

Примеры использования сортера клеток S3e, Bio-Rad

Видео 5 минут: Investigating Cancer Stem Cells with the S3e Cell Sorter

Лекция 50 минут: Advanced Topics in Cell Sorting

Видео 5 минут: Identifying Predictive Biomarkers for Successful Immunotherapy Treatments.

Find out how the S3e Cell Sorter can help scientists discover new biomarkers that have the potential to become new therapies for cancer and other diseases.

Статьи с использованием сортера клеток S3e, Bio-Rad

1. Exosome mediated miR-155 delivery confers cisplatin chemoresistance in oral cancer cells via epithelial-mesenchymal transition Prathibha Kirave, Piyush Gondaliya1, Bhagyashri Kulkarni1, Rakesh Rawal, Rachana Garg, Alok Jain and Kiran Kalia

Естественный груз для миРНК это эксосомы, которые облегчают межклеточную коммуникацию в микросреде опухоли. Нарушение регуляции miRNA обычное явление при раке, и играет важную роль в устойчивости к химиотерапии. Опосредованный экзосомами перенос miRNA может играть важную роль устойчивости к лекарственным препаратам и служить мишенью для терапии рака. В изучению эксосомов, miRNA, сортер клеток S3e, Bio-Rad имеет критическую роль в данном случае для определения клеточного цикла. doi: 10.18632/oncotarget.27531

2. Strong increase in the autofluorescence of cells signals struggle for survival. Jérémy Surre

Прокариотические и эукариотические клетки обладают собственной естественной флуоресценцией из-за присутствия флуоресцентных клеточных структурных компонентов и метаболитов. Клеточная аутофлуоресценция (AF) зависит от метаболического состояния клеток. В данной статье было изучено воздействие различных стрессоров на изменение аутофлуоресценции клеток Escherichia coli. Спектры возбуждения и испускания, а также повышенная экспрессия генов биосинтеза флавинов убедительно свидетельствуют о том, что флавины вносят основной вклад увеличению аутофлуоресценции.

Повышенная экспрессия генов, кодирующих различные флавопротеины, указывает на клеточную стратегию борьбы с тяжелыми стрессами. Наблюдаемое усиление аутофлуоресценции при стрессе – это эволюционно законсервированное явление, поскольку оно происходит не только в клетках разных видов бактерий, но также в клетках дрожжей и человека. Влияние ампициллина на прямое рассеяние света и интенсивность автофлуоресценции клеток E. coli, а так же клеточное выживание, определялось сортером клеток S3e, Bio-Rad. doi: 10.1038/s41598-018-30623-2

3. Purification of high-quality RNA from a small number of fluorescence activated cell sorted zebrafish cells for RNA sequencing purposes Siebe Loontiens, Lisa Depestel, Suzanne Vanhauwaert, Givani Dewyn, Charlotte Gistelinck, Karen Verboom, Wouter Van Loocke, Filip Matthijssens, Andy Willaert, Jo Vandesompele, Frank Speleman & Kaat Durinck

Контроль транскрипции зависит от активности комплексов факторов транскрипции, метилирования ДНК, динамики модификации хроматина, а также образования петель ДНК более высокого порядка. На перестройку транскрипционных сетей во время развития рака большое влияние оказывают генетические поражения и эпигенетические изменения. Секвенирование РНК в настоящее время служит золотым стандартом для подробной и объективной молекулярной характеристики модельных систем как in vitro, так и in vivo.

В последние годы zebrafish (Danio rerio) становится все более важной в качестве модельного организма. Эмбриональное развитие у рыбок данио происходит быстро. Разработка линий флуоресцентных репортеров рыбок Danio rerio, в которых флуоресцентный маркер управляется промотором (специфичным для определенного типа клеток), делает возможным выполнение сортировки флуоресценцией клеток – сортер клеток S3e, Bio-Rad. Таким образом можно определять клеточное - специфические транскриптом, которые могли бы быть замаскированы при анализе РНК, полученной из целого эмбриона. Сортировка большого количества клеток (> 1 миллиона) не всегда возможна при работе с флуоресцентными репортерными эмбрионами. В зависимости от выбранного промотора флуоресцентный маркер может экспрессироваться только в небольшом количестве клеток и, таким образом, приводит к низкому выходу РНК. Учитывая важность получения достаточного количества высококачественной РНК для исследований экспрессии, было оптимизировано извлечение РНК из отсортированных с помощью – сортер клеток S3e, Bio-Rad – клеток эмбрионов рыбок данио и провелена углублення оценка качества извлеченной РНК. doi: 10.1186/s12864-019-5608-2

Настольный клеточный сортер на базе CytoFLEX S от компании Beckman Coulter – CytoFLEX SRT – вобрал все лучшее от клеточных анализаторов CytoFLEX (лавинные фотодиодные детекторы (APD), высокую чувствительность и удобство использования), добавив возможность сортировки до 4 клеточных популяций.

Технические характеристики:

• фиксированная встроенная оптика и кварцевая проточная ячейка;
• непревзойденная чувствительность лавинных фотодиодов;
• абсолютная линейность детекторов упрощает настройки компенсации;
• до 4-х лазеров и 15 флуоресцентных параметров;
• доступные лазеры: 488 нм 50 мВт, 405 нм 80 мВт, 561 нм 30 мВт, 638 нм 100 мВт;
• 4-струйная сортировка с поддержкой комбинированных режимов, позволяющих собирать отклоненные капли (aborts) для последующего анализа;
• сортировка в 96 и 384-луночные планшеты с опцией индексной сортировки;
• автоматизированная настройка сортировки:
  • автоматизированное формирование капель и расчет drop-delay;
  • автоматизированный мониторинг и оптимизация боковых струй;
• опциональный модуль температурного контроля;
• опциональная система удаления аэрозоля и/или шкаф биобезопаности.

Этот инструмент может аккуратно и точно сортировать in situ отдельные активные клетки, обеспечивая систематическое решение для наблюдения и мониторинга, захвата, манипулирования, разделения и извлечения отдельных клеток, реализуя концепцию «вы получаете то, что видите».

EasySort Compact легко контролирует траекторию движения отдельных клеток с помощью оптического пинцета и использует уникальную запатентованную технологию RAGE (Raman-Activated Gravity-driven single-cell Encapsulation), основанную на гравитации, позволяющую быстро упаковать любую целевую клетку диаметром более 1 мкм в единичную каплю, которые можно затем использовать для дальнейших экспериментов. EasySort Compact может широко использоваться в различных типах экспериментов по выделению, сортировке, культивированию и секвенированию единичных клеток.

Впервые достигается надежная сортировка и микрокапельное капсулирование отдельных бактерий в сложных образцах для обеспечения жизнеспособности клеток и качества ДНК/РНК.

Особенности продукта EasySort Compact

• Сортировка одиночных клеток с сохранением их активности in situ;
• запатентованная технология RAGE (Raman-Activated Gravity-driven single-cell Encapsulation):
• клетки сортируются в растворе водной микросреды для максимального сохранения метаболической активности одиночных клеток;
• многорежимная визуализация:
• встроенные модули светлого поля и флуоресценции;
• поддержка сортировки отдельных клеток под светлопольным, флуоресцентным или рамановским микроскопом для обеспечения максимальной гибкости при идентификации клеток-мишеней;
• защита от загрязнения:
• встроенный светодиод для УФ-стерилизации;
• отдельное пространство для сортировки образцов, чтобы свести к минимуму любое потенциальное экспериментальное загрязнение;
• полностью интегрированная конструкция системы:
• с дружественным пользовательским интерфейсом, требующим лишь минимального обучения.

Технические параметры сортера EasySort Compact

FlowRACS, автоматизированная система сортировки отдельных клеток, основанная на технологии диэлектрического гистерезиса в высокоскоростном потоке жидкости pDEP-RACS (positive dielectrophoresis-based Raman-activated droplet sorting), позволяет определять характеристики клеток на основе метаболических феномов и сортировать их на высокой скорости с помощью спектров комбинационного рассеяния света. FlowRACS работает с клетками без маркировки или окрашивания, в процессе анализа клетки сохраняют жизнеспособность.

FlowRACS не требует изоляции и культивирования, напрямую идентифицирует отдельные виды клеток и может анализировать метаболизм субстрата, синтез веществ, сети взаимодействия метаболитов, экологический стресс, межвидовые взаимодействия и т. д. в параллельных группах метаболических фенотипов и их межклеточную гетерогенность.

В процессе анализа клетки выстраиваются в линию и последовательно на высокой скорости проходят через точку опроса для получения спектра комбинационного рассеяния. После получения спектров собираются только клетки (или микрокапли, содержащие отдельные клетки) с целевыми спектрами комбинационного рассеяния света (т.е. целевыми метаболическими функциями). Пропускная способность FlowRACS в настоящее время составляет 300-600 клеток/мин.

Ее оригинальная технология pDEP-RACS точно улавливает и собирает одноклеточные рамановские сигналы на основе диэлектрического гистерезиса в высокоскоростном потоке жидкости, преодолевая ограничения пропускной способности рамановской сортировки отдельных ячеек и тем самым завершая одноклеточные рамановские сигналы. Интеграция сбора и сортировки отдельных клеток (и экспорта микрокапель).

FlowRACS использует алгоритм анализа полного рамановского спектра, который интерпретирует и ищет рамановский спектр в режиме реального времени. Прибор представляет собой решение нового поколения для быстрого и недорогого профилирования метаболических явлений, функционального анализа природных клеток и ферментов, а также анализа механизмов функционирования сложных биологических систем, и все это с разрешением одной клетки.

Особенности продукта FlowRACS

• Получение спектров комбинационного рассеяния одиночных клеток c исключительным качеством:
• оригинальная технология pDEP-RACS используется для обеспечения точного захвата одиночных клеток на высокой скорости в точке опроса рамановским лазером. Применение диэлектрического гистерезиса эффективно решает проблему слабых рамановских сигналов клеток в высокоскоростном потоке жидкости и обеспечивает высококачественную рамановскую визуализацию;
• полностью автоматизированная высокопроизводительная сортировка отдельных клеток:
• технология диэлектрического детерминированного латерального смещения (pDEP-DLD) используется для достижения эффективной фокусировки для формирования потока одиночных клеток и высокопроизводительной сортировки клеток-мишеней (пропускная способность сортировки 300-600 клеток/мин);
• максимальное сохранение жизнеспособности клеток:
• рамановский сбор и сортировка одиночных клеток выполняются в жидкой среде, которая в наибольшей степени сохраняет активность клеток и целостность генома, не требуют использования внешних меток и могут быть совмещены с последующимс культивированием и секвенированием одиночных клеток;
• интеллектуальный анализ данных:
• алгоритм анализа полного рамановского спектра одиночных клеток в режиме реального времени обеспечивает универсальное решение для анализа метаболического фенотипа отдельных клеток, сортировки и интеллектуального анализа данных.

Технические параметры cортера FlowRACS