Проточные цитофлуориметры (цитометры) — высокопроизводительные системы анализа частиц (как правило, клеток) в потоке жидкости. Анализ частиц ведется с большой скоростью (до десятков тысяч в секунду), причем каждая частица анализируется отдельно. Метод проточной цитометрии позволяет получать за короткое время качественные и количественные данные по анализируемым частицам с высокой статистической достоверностью. Проточные цитометры используются для широкого круга задач, связанных с анализом клеток, таких как подсчет клеток, иммунофенотипирование (в иммунологии, гематологии, онкологии, при культивировании клеток и пр.), клеточный цикл и пролиферация, клеточное здоровье и апоптоз, автофагия, клеточный сигналинг, токсикология, эффективность трансфекции и т.д. Типичные объекты — клетки человека и животных, клетки растений и микроводоросли, дрожжи, бактерии, микрочастицы и экзосомы.
Muse — компактный клеточный анализатор, работающий по принципу проточной цитометрии для простого и недорого и быстрого анализа. Управление через сенсорный дисплей, интуитивное программное обеспечение, оптимизированные наборы реагентов формата «смешать и измерить» вместе обеспечивают существенное упрощение решения исследовательских задач.
Клеточный анализатор Muse обеспечивает прямое измерение концентрации клеток (без использования референсных частиц) и количественную детекцию флуоресцентных параметров. Оптимизированные наборы реагентов и адаптированные к ним модули программного обеспечения позволяют определять жизнеспособность клеток, апоптоз на разных этапах, исследовать пролиферацию и клеточный цикл, клеточный сигналинг, параметры иммунного статуса и др.
Analisys
Cell concentration
Viability
Average % CV
% CV Range
Average % CV
% CV Range
Image-based Automated Counter
9,2%
1,2-23,3%
3,7%
0,8-12,1%
Manual Hemocytometer
9,2%
6,3%
4,5%
0,5-9,2%
Muse
4%
0,3-8,8%
2,2%
0,4-5,6%
Преимущества системы:
компактность: можно поставить в любом месте;
легкость и простота использования: готовые наборы реагентов c упрощенной пробоподготовкой;
интуитивное управление: позволяет сделать работу максимально комфортной;
программные модули адаптированы под наборы реагентов: простой анализ образцов;
универсальность: два открытых программных модуля под реагенты пользователя;
возможность обслуживания без участия сервисного инженера.
Другие методы анализа
Muse
Счетные камеры (например, камера Горяева)
Ограничения в связи с низким разрешением поглощения красителя для определения жизнеспособности. Погрешности, связанные с ручным подсчетом.
Анализ Muse Count and Viability
Точный, основанный на флуоресцентном окрашивании метод определения живых и мертвых клеток. Микрокапиллярная флюидика для прямого подсчета концентрации с высокой точностью.
Автоматические гемоцитометры и клеточные анализаторы на основе светлопольной микроскопии
Низкая точность в результате анализа небольшого числа клеток, использование ограничено подсчетом концентрации и жизнеспособности.
Методы анализа Muse
Флуоресцентный сигнал на основе специфичного связывания реагентов с мишенями. Статистическая достоверность достигается измерением тысяч клеток за несколько минут.
Вестерн-блот и другие методы обобщенного анализа клеточной популяции
Гетерогенность популяции теряется при пулировании.
Методы времязатратные и требуют внешнего контроля.
Реагенты должны быть оптимизированы и валидированы.
Результаты качественные или, в лучшем случае, полуколичественные.
Методы анализа Muse
Результаты для популяции в каждом образце на основе анализа каждой клетки.
Очень простые методы пробоподготовки, дополнительно нужны только пипетки.
Реагенты оптимизированы и валидированы для использования на разных типах клеток.
Большие проточные цитометры
Реагенты должны быть валидированы.
Оптимизация требует затрат времени и ценного образца.
Нужна отдельная настройка установок прибора под каждую задачу.
Методы анализа Muse
Флуоресцентные реагенты уже подобраны под лазер и детекторы Muse, оптимизированы для разных типов клеток.
Валидированные методы анализа, оптимизированная пробоподготовка и предустановленные настройки прибора в программном обеспечении.
Уникальная особенность Attune NxT — функция акустической фокусировки, позволяющей проводить измерения с высокой скоростью без потери качества, сохраняя низкую вариабельность.
Возможности Attune NXT при анализе плоидности:
высокая скорость измерения с сохранением низких значений коэффициента вариации;
возможность использовать готовые реагенты Thermo FS для окраски ядер или использовать реагенты сторонних производителей;
отработанные протоколы для разных задач в анализе плоидности;
классический анализ плоидности при помощи голубого лазера (488 нм) и йодистого пропидия;
возможность установки дополнительных лазеров (можно докупать после покупки прибора);
легкая замена фильтров при необходимости их оптимизации;
возможность использовать опциональный автосэмплер и роботизированную подачу для автоматической смены образцов и ускорения производительности;
универсальность — при необходимости прибор можно использовать и для других задач в области проточной цитометрии.
Технические характеристики:
лазеры — 1 (488 нм, 50 мВт), возможен апгрейд на рабочем месте пользователя до 4х-лазерной конфигурации;
профиль лазера: 10 x 50 мкм, с плоской вершиной;
каналы детекции — FSC¹, SSC², 4 флуоресцентных (до 14 флуоресцентных параметров при покупке дополнительных лазеров);
чувствительность MESF³ — ≤ 80 MESF for FITC, ≤ 30 MESF for PE;
формат загрузки — пробирки размерами от 17 x 100 мм до 8,5 x 45 мм (включая стандартные пробирки на 1,5, 2 и 5 мл), опциональный автозагрузчик для 96- и 384-луночных планшетов;
скорость потока — 12,5-1000 мкл/мин;
скорость сбора данных — до 65 000 событий/сек;
метод определения концентрации частиц — прямой подсчет;
габариты, Ш × Г × В — 400 × 580 × 430 мм;
вес — 29 кг.
Предложение включает проточный цитофлуориметр Attune NxT, оснащенный лазером 488 нм и 4 детекторами флуоресценции, 1 год гарантии. В комплект поставки входит дополнительный фильтр 603/48, оптимизированный под флуоресценцию йодистого пропидия, и стартовый набор реагентов для запуска.
¹ forward scatter, прямое светорассеивание;
² side scatter, боковое светорассеивание;
³ molecules of equivalent soluble fluorochrome, число молекул эквивалентного растворимого флуорохрома.
В данном приборе реализованы запатентованные конструкции блоков детекторов (Octagon и Trigon), в которых луч последовательно отражается и направляется на соответствующие детекторы.
Это обеспечивает высокую эффективность регистрации сигнала при минимальной потере.
Система последовательного отражения повышает чувствительность прибора. Первыми регистрируются наиболее слабые сигналы наибольшей длины волны, последними — сильные.
минимальный объем образца, мкл — 300;
размер измеряемых частиц, мкм — до 50;
скорость потока, мкл/мин — 10-120;
проточная ячейка с фиксированной настройкой;
система гидродинамического фокусирования потока в ячейке;
скорость обработки данных, событий/ с — до 10000;
двухлазерная оптическая система (возможна опциональная установка фиолетового лазера):
Новая компактная платформа для мультипараметрического анализа клеточных культур.
Запатентованная система автоматической настройки каждого лазера обеспечивает стабильность и воспроизводимость результатов исследований;
оптические фильтры легко заменяемы;
каждый фильтр снабжен интегрированным микропроцессором, регистрирующим место положения данного фильтра в системе, что позволяет легко в автоматическом режиме перенастраивать оптическую конфигурацию прибора в зависимости от задач исследования.
Технические характеристики
Источники излучения: полупроводниковые лазеры 488 нм, 640 нм и 405 нм;
количество каналов детекции: до 13 одновременно (4 для 488 нм, 2 для 640 нм и 2 для 405 нм);
количество каналов детекции флуоресценции - до 8;
минимальный размер определяемых частиц: < 200 нм;
чувствительность: FITC: <20 MESF, PE: <133 MESF";
подача образца из пробирок различных форматов: 50 мл, 15 мл, 5 мл, 1,5 мл, 0,5 мл;
Уникальная особенность Attune NxT — функция акустической фокусировки, позволяющей проводить измерения с высокой скоростью без потери качества, сохраняя низкую вариабельность.
Возможности технологии акустической фокусировки:
высокая скорость анализа при минимальном расходе реагентов;
высокая точность и минимальная вариабельность данных;
быстрый анализ без потери чувствительности;
детекция редких событий в количестве, достаточном для статистической обработки;
окраска антителами без необходимости отмывки.
Технические характеристики:
лазеры — 3 (405 нм, 50 мВт; 488 нм, 50 мВт; 637 нм, 100 мВт), возможен апгрейд на рабочем месте пользователя до 4х-лазерной конфигурации;
профиль лазеров: 10 x 50 мкм, с плоской вершиной;
каналы детекции — FSC¹, SSC², 11 флуоресцентных (до 14 флуоресцентных параметров при покупке дополнительных лазеров);
чувствительность MESF³ — ≤ 80 MESF for FITC, ≤ 30 MESF for PE, ≤70 MESF for APC;
формат загрузки — пробирки размерами от 17 x 100 мм до 8,5 x 45 мм (включая стандартные пробирки на 1,5, 2 и 5 мл), опциональный автозагрузчик для 96- и 384-луночных планшетов;
скорость потока — 12,5-1000 мкл/мин;
скорость сбора данных — до 65 000 клеток/сек;
метод определения концентрации клеток — прямой подсчет;
габариты, Ш × Г × В — 400 × 580 × 430 мм;
вес — 29 кг.
¹ forward scatter, прямое светорассеивание;
² side scatter, боковое светорассеивание;
³ molecules of equivalent soluble fluorochrome, число молекул эквивалентного растворимого флуорохрома.
Особенность всех проточных цитофлуориментров серии Guava easyCyte – проточная ячейка на основе запатентованной микрокапиллярной технологии. Использование микрокапиллярных взаимодействий для выравнивания клеток в потоке позволило отказаться от обжимающей жидкости и снизить количество отходов (до 80 мл за 8 часов работы).
Интуитивное программное обеспечение собирает и анализирует данные с помощью готовых программных модулей либо на основе настроек, самостоятельно оптимизированных пользователем для решения исследовательских задач.
Проточные цитометры Guava easyCyte компактные, экономичные и простые в работе и обслуживании. Микрокапиллярная проточная ячейка построена на основе кварцевого капилляра квадратного сечения со стороной 100 мкм, пригодна для работы с разным типом клеток, ее обслуживание (в том числе при забивке) проводится пользователем и не требует вызова сервисного инженера. Существуют конфигурации с разным набором лазеров и детекторов, с загрузкой из одиночных пробирок и/или из 96-луночных планшетов. Конфигурации не модифицируются после покупки, поэтому с задачами и способами их решения нужно определиться заранее. В целом, это простой, надежный и недорогой прибор для решения разного типа задач.
Технические характеристики:
твердотельные полупроводниковые лазеры, до 3 лазеров из списка: 405, 488, 532 и 642 нм;
регистрация до 14 параметров: 2 детектора светорассеяния и до 12 каналов флуоресценции;
минимальный объем образца — 100 мкл для лунок планшета, 150 мкл для пробирок объемом 0,5 мл, 900 мкл для пробирок объемом 1,5 мл;
диапазон концентрации клеток, тыс. кл./мл — 10-500;
скорость: 70-700 мкл/мин, 10-1000 событий в секунду;
точность: коэффициент вариации менее 5% (определен по ядрам эритроцитов курицы);
размер клеток/частиц, мкм: 0,2 – 60+;
количество отходов: 50 мл за 8 часов работы;
формат загрузки образцов — пробирка (тип «эппендорф», 1,5 мл), опциональный автозагрузчик для 96-луночных планшетов и пробирок 0,5/1,5 мл;
Проточная цитометрия с функцией визуализации в потоке — это новое направление, сочетающее в себе не только возможности математического и статистического анализа клеток, но и микроскопию высокого разрешения каждой анализируемой клетки в потоке.
Системы ImageStreamX MKII и FlowSight обеспечивают анализ большого количества изображений каждой клетки в потоке, включая светлопольный и темнопольный каналы (SSC) и до 10 флуоресцентных каналов на высокой скорости.
Комбинирование скорости, чувствительности и фенотипических возможностей проточной цитометрии с одной стороны и детализации изображений и функциональных возможностей
микроскопии с другой стороны, позволяют визуализирующим проточным цитометрам ImageStream и FlowSight обойти ограничения обоих методов и открывают двери для широкого
спектра новых приложений.
Цитометры FlowSight и ImageStreamX функционируют как обычные проточные цитометры, но также обеспечивают анализ изображений каждой клетки. Мощное и интуитивно понятное программное обеспечение позволяет беспрепятственно связывать количественные данные
с изображениями:
нажмите на точку в любом плоте данных, чтобы увидеть соответствующее изображение;
кликните на интервал на любой гистограмме, чтобы увидеть каждую клетку в этом интервале;
нарисуйте гейты на дот-плотах и вы увидите результирующие популяции клеток для валидации результатов.
Иннновационная технология цитометров Amnis увеличивает сигнал и уменьшает шум, обеспечивая беспрецедентную фотонную чувствительность. Детали конфигурации, такие как специальный боковой скаттер-лазер, регулируемая интенсивность лазерного излучения и анализ светлопольных изображений для прямого анализа клеток позволяют системе более эффективно разделять клеточные популяции, чем при использовании более дорогих проточных цитометров. Простота в использовании, выдающаяся производительность и анализ изображений каждой клетки отвечают потребностям как новичков, так и экспертов в области проточной цитометрии.
Применим в любой научно-исследовательской дисциплине;
детекция с использованием высокочувствительной камеры Hamamatsu, что позволяет драматически улучшить разрешение по отношению к традиционным проточным цитометрам;
сконфигурирован для задач лабораторий любого фокуса и бюджета;
характеризует популяции практически по любому визуальному или флуоресцентному параметру;
лазеры — до 4-х:
стандартно — 488 нм;
опция — 405, 561, 642 нм;
до 12 каналов детекции;
опциональный автосэмплер для 96-луночных планшетов;
Уникальная особенность Attune NxT — функция акустической фокусировки, позволяющей проводить измерения с высокой скоростью без потери качества, сохраняя низкую вариабельность.
Возможности технологии акустической фокусировки:
высокая скорость анализа при минимальном расходе реагентов;
высокая точность и минимальная вариабельность данных;
быстрый анализ без потери чувствительности;
детекция редких событий в количестве, достаточном для статистической обработки;
окраска антителами без необходимости отмывки.
Технические характеристики:
лазеры — до 4х одновременно из 5 доступных: 405 нм (50 мВт), 488 нм (50 мВт), 532 (100 мВт), 561 нм (50 мВт), 637 нм (100 мВт);
профиль лазеров: 10 x 50 мкм, с плоской вершиной;
каналы детекции — FSC¹, SSC², до 14 флуоресцентных, опциональный дополнительный параметр SSC на фиолетовом лазере (405 нм);
чувствительность MESF³ — ≤ 80 MESF for FITC, ≤ 30 MESF for PE, ≤70 MESF for APC;
формат загрузки — пробирки размерами от 17 x 100 мм до 8,5 x 45 мм (включая стандартные пробирки на 1,5, 2 и 5 мл), опциональный автозагрузчик для 96- и 384-луночных планшетов;
скорость потока — 12,5-1000 мкл/мин;
скорость сбора данных — до 65 000 клеток/сек;
метод определения концентрации клеток — прямой подсчет;
габариты, Ш × Г × В — 400 × 580 × 430 мм;
вес — 29 кг.
¹ forward scatter, прямое светорассеивание;
² side scatter, боковое светорассеивание;
³ molecules of equivalent soluble fluorochrome, число молекул эквивалентного растворимого флуорохрома.
Проточный цитофлуориметр ZE5 — надежный, гибкий, высокопроизводительный анализатор для лабораторий с большим потоком образцов.
Возможности ZE5:
большое количество анализируемых параметров (до 30) обеспечивают гибкость в работе;
высокая скорость анализа (до 100 000 событий в секунду, < 8 мин на 96-луночный планшет) обеспечивает высокую производительность;
конструкция оптической системы (одинаковое расстояние от проточной ячейки до каждого детектора), фотоумножители Hamamatsu H11903 обеспечивают высокую чувствительность и разрешение;
увеличенная стабильность лазерного пучка, верифицирование оптической системы ZE5 EYE обеспечивают стабильность и надежность результатов;
возможность прямого подключения внешнего источника деионизированной воды и слива, замена емкостей с сервисными растворами без остановки измерения, автоматические процедуры старта и выключения обеспечивают удобство в обслуживании;
универсальный автоматический автозагрузчик для любого типа пробирок или планшетов, контроль температуры, переноса пробы, предотвращение повреждения пробозаборника;
возврат неиспользованного образца;
конструкция проточной ячейки, высокочувствительная электроника обеспечивают низкие CV даже при высокой скорости потока.
Первый в мире компактный цитофлуориметр с жёлтым лазером!
Компактный, легкий в использовании проточный цитофлуориметр CytoFLEX, разработан с применением самых передовых технологий для широкого спектра научных исследований.
Уникальная конструкция цитометра и конфигурации от 1 до 3 лазеров и от 4 до 13 цветов обеспечивают поддержку большинства самых передовых многоцветных приложений.
Компактные размеры, простое обслуживание, исключительные чувствительность, разрешение и надежность отличают CytoFLEX во всех его конфигурациях. Все это вместе со стабильной производительностью обеспечивает конкурентные преимущества CytoFLEX.
Запатентованный детекторный модуль на базе технологии спектрального мультиплексирования состоит из твердотельных, высокоэффективных фотодиодных детекторов с низким уровнем шума, что обеспечивает экстраординарное разрешение для получения более точных данных и лучшей регистрации редких событий.
Технические характеристики
Источники излучения: полупроводниковый лазер 488 нм, 638 нм 561 нм и 405 нм;
количество каналов детекции: до 13 одновременно (5 для 488 нм, 3 для 638 нм 4 для 561 нм и 5 для 405 нм);
минимальный размер определяемых частиц: < 200 нм (с использованием бокового светорассеяния от лазера 405 нм);
чувствительность: FITC: <30 MESF, PE: <10 MESF";
скорость регистрации событий: до 30 000 соб/с;
габариты, ШхГхВ, см - 42,5 x 42,5 x 34;
вес, кг – 23,4.
Комплект поставки:
проточный цитофлуориметр;
рабочая станция с программным обеспечением CytExpert;
Проточная цитометрия с функцией визуализации в потоке — это новое направление, сочетающее в себе не только возможности математического и статистического анализа клеток, но и микроскопию высокого разрешения каждой анализируемой клетки в потоке.
Системы ImageStreamX MKII и FlowSight обеспечивают анализ большого количества изображений каждой клетки в потоке, включая светлопольный и темнопольный каналы (SSC) и до 10 флуоресцентных каналов на высокой скорости.
Комбинирование скорости, чувствительности и фенотипических возможностей проточной цитометрии с одной стороны и детализации изображений и функциональных возможностей
микроскопии с другой стороны, позволяют визуализирующим проточным цитометрам ImageStream и FlowSight обойти ограничения обоих методов и открывают двери для широкого
спектра новых приложений.
Цитометры FlowSight и ImageStreamX функционируют как обычные проточные цитометры, но также обеспечивают анализ изображений каждой клетки. Мощное и интуитивно понятное программное обеспечение позволяет беспрепятственно связывать количественные данные
с изображениями:
нажмите на точку в любом плоте данных, чтобы увидеть соответствующее изображение;
кликните на интервал на любой гистограмме, чтобы увидеть каждую клетку в этом интервале;
нарисуйте гейты на дот-плотах и вы увидите результирующие популяции клеток для валидации результатов.
Иннновационная технология цитометров Amnis увеличивает сигнал и уменьшает шум обеспечивая беспрецедентную фотонную чувствительность. Детали конфигурации, такие как специальный боковой скаттер-лазер, регулируемая интенсивность лазерного излучения и анализ светлопольных изображений для прямого анализа клеток позволяют системе более эффективно разделять клеточные популяции, чем при использовании более дорогих проточных цитометров. Простота в использовании, выдающаяся производительность и анализ изображений каждой клетки отвечают потребностям как новичков, так и экспертов в области проточной цитометрии.
Анализирует тысячи клеток в секунду при 60X увеличении;
простой пользовательский интерфейс с графиками и гейтированием в режиме реального времени;
система может быть сконфигурирована с любым числом лазеров — от одного до семи;
изменение увеличения микроскопа позволяет осуществлять анализ изображений как мелких частиц, так и очень больших клеток или даже их конгломератов.
Технические характеристики:
лазеры – до 7:
стандартно 488 нм;
опция 375, 405, 561, 592, 642, 730 нм;
стандартно 6 каналов флуоресценции высокого разрешения (до 12 каналов опционально);
увеличение 40Х (стандарт) и 20Х, 60Х (опция);
опциональный автосэмплер для 96-луночных планшетов.
Проточный цитометр CellStream, Luminex — компактная система, обладающая высокой чувствительностью и гибкостью для мультипараметрического анализа клеток и субмикронных частиц:
до 7 неколлинеарных лазеров,
до 20 флуоресцентных каналов,
возможность визуальной верификации результатов.
Уникальная система детекции сигнала Amnis, используемая в цитометрах CellStream, обеспечивает высокую чувствительность, до 10 раз превышающую чувствительность фотоумножителей (PMT, photomultiplier tube) традиционных систем проточной цитометрии. CCD камера с большой скоростью захватывает усиленные с помощью технологии TDI (time delay integration, накопление сигнала во времени) изображения низкого разрешения и трансформирует их в высокоинформативные данные по интенсивности. В результате исследователь получает данные по интенсивности, привычные для традиционной проточной цитометрии, но с большей чувствительностью флуоресценции.
В отличие от традиционных систем на базе PMT, проточный цитометр CellStream регистрирует изображения, что дает возможность анализировать морфологические параметры и обеспечивает визуализацию всех событий, а следовательно, и простую верификацию выделения популяций, отделения одиночных событий от агрегатов и т.д.
Уникальные возможности CellStream:
запатентованная камера с уникальной технологией TDI для проточных цитометров Amnis;
визуальное подтверждение результатов;
высокие чувствительность и разрешение;
анализ морфологических параметров: площадь, соотношение сторон, значение интенсивности самого яркого пикселя — наряду с данными по общей интенсивности;
детекция и разделение субмикронных частиц;
автоматические очистка и калибровка;
автосэмплер для 96-луночного планшета уже в базовой комплектации;
Сортер клеток S3e от Bio-Rad — это инновационная система сортинга с классической системой гидродинамической фокусировки, предназначенная для решения научно-прикладных задач в области сортировки клеток, в зависимости от сигнала флуоресцентной метки. В приборе реализована инновационная технология ProDrop.
В проточном цитометре, оборудованном системой для сортировки клеток, проточная ячейка закреплена на пьезокристалле. При подаче на него напряжения кристалл вместе с ячейкой совершает колебания с заданной частотой, в результате чего струя жидкости с клетками разбивается на отдельные капли. Проходя сквозь заряжающее кольцо, капля может приобретать положительный или отрицательный заряд в зависимости от того, какая клетка содержится внутри капли. Пролетая мимо отклоняющих пластин, капля с клеткой притягивается к ним, выходит из основного потока и попадает в пробирку. Суть технологии ProDrop заключается в том, что после прохождения процедуры детекции и сортинга калибровочных частиц ProLine, несортированные частицы подвергаются вторичной детекции на выходе, что позволяет оценить, насколько успешно прошла процедура сортировки, и в автоматическом режиме внести коррекцию процедуры без вмешательства пользователя.
Технические характеристики:
уровень чувствительности, событий/сек — до 100000;
частота сортировки, событий/сек — до 30000;
точность сортировки, % — более 99;
диаметр сопла, мкм — 100;
направление сортировки — 2-х линейное;
источник света — до 3 лазеров на выбор из 4 доступных (405, 488, 561, 640 нм);
детекция в 4-х флуоресцентных каналах (525/30, 586/25, 615/25, 655 нм);
чувствительность менее <125 MESF для красителей FITC и PE;
сортировка до 5 пробирок по 5 мл каждого направления селекции,
возможность сортировки в стрипованные пробирки и на предметные стекла
для микроскопии;
минимальное разрешение — 0,5 мкм;
система охлаждения Пельтье, температурный диапазон, °C — от 4 до 37;
габариты, ШхГхВ, см — 70×65×65.
Комплект поставки: сортер клеток S3e, лазерs 488 и 561 нм, 4 флуоресцентных детектора, калибровочный набор, контейнеры (2 шт.) для реагентов и отходов, соединительные трубки, ПО ProSort, кабель, ПК.
Сортеры клеток сочетают в себе функции проточного цитофлуориметра с возможностью автоматизированной сортировки клеток, в зависимости от параметров, заданных оператором.
Одновременная регистрация до 13 оптических параметров флуоресценции и 2-х параметров светорассеяния;
совместимость с пробирками от 15 до 2 мл;
источники света:
- твердотельный лазер 488 нм; - гелий-неоновый лазер (633 нм) с воздушным охлаждением; - прибор позволяет опционально устанавливать;
возможность установки до 20 детекторов, что позволяет регистрировать одновременно до 18 цветов;
система возбуждающей и собирающей оптики организована в виде запатентованных восьми- и треугольной конфигураций (фильтры и зеркала устанавливаются в соответствии с задачами пользователя):
- оптическая система Octagon — регистрирует до 7 сигналов флуоресценции в диапазоне 515-810 нм и боковое светорассеяние; - система собирающей оптики Trigon — регистрирует до трех сигналов в диапазонах 650-810нм;
чувствительность и собирающая оптика:
- регистрация частиц 0,5 мкм по прямому и боковому светорассеянию; - скорость регистрации — до 70000 событий/с (при регистрации 8 параметров);
проточная система:
- проточная ячейка с кварцевой кюветой запатентованной конструкции; - пространство между кюветой и собирающими линзами заполнено гелем, для предотвращения преломления луча; - размер сменных сопел, мкм — 70, 85, 100 и 103; - возможность самостоятельной замены сопла; - автоматическая промывка; - давление, кПа — 14-517 (в соответствии с требованиями протокола сортинга);
гидравлическая система представляет из себя тележку с размещенными на ней насосом, контейнерами для проточной и консервирующей жидкостями, а так же контейнеров для отходов и 3 дополнительных контейнера для очищающей жидкости;
камеры сбора образца:
- соблюдение асептических условий при извлечении пробирок; - очистка камеры и удаление из камеры аэразольных частиц во время сортировки; - регулировка режимов термостатирования и встряхивания; - автоматическое закрытие пробирок для сбора образца при обнаружении засора.
Проточные цитофлуориметры (цитометры) — высокопроизводительные системы анализа частиц (как правило, клеток) в потоке жидкости. Анализ частиц ведется с большой скоростью (до десятков тысяч в секунду), причем каждая частица анализируется отдельно. Метод проточной цитометрии позволяет получать за короткое время качественные и количественные данные по анализируемым частицам с высокой статистической достоверностью.
Проточные цитометры используются для широкого круга задач, связанных с анализом клеток, таких как подсчет клеток, иммунофенотипирование (в иммунологии, гематологии, онкологии, при культивировании клеток и пр.), клеточный цикл и пролиферация, клеточное здоровье и апоптоз, автофагия, клеточный сигналинг, токсикология, эффективность трансфекции и т.д. Типичные объекты — клетки человека и животных, клетки растений и микроводоросли, дрожжи, бактерии, микрочастицы и экзосомы.
Центральным элементом проточного цитометра является проточная ячейка, в которой клетки выстраиваются друг за другом в ламинарном потоке жидкости и проходят через луч лазера. Лазерный луч, проходя через клетку, отклоняется, рассеивается и вызывает флуоресценцию красителей, которыми маркируются исследуемые структуры.
Отклоненный и рассеянный свет облучающего лазера, а также свет, полученный в результате флуоресценции, попадает на детекторы, переводится в цифровой сигнал, значение которого пропорционально интенсивности попавшего на детекторы света. Данные по интенсивности обрабатываются компьютером и выводятся в виде графиков и статистических характеристик.
Существует несколько типов проточных ячеек. Большинство проточных цитометров использует проточную ячейку с гидродинамической фокусировкой: ламинарный поток создается потоком обжимающей жидкости (sheath fluid), которая со всех сторон «обжимает» образец. Другой тип проточных ячеек использует капиллярные взаимодействия для создания ламинарного потока: образец подается в микрокапилляр или в чип, работающий по принципу микрофлюидики.
Скорость, с которой клетки движутся в потоке, определяет время измерения: чем выше скорость, тем быстрее проходит измерение, но выше вариабельность результатов (часто выражается в виде коэффициента вариации, CV, coefficient of variation). Высокие значения CV могут затруднить разделение популяций клеток, усложнить трактовку результатов измерения. Для уменьшения CV при больших скоростях может применяться акустическая фокусировка клеток в потоке.
В качестве источника света в проточных цитометрах используются лазеры. Наиболее универсальный — голубой (длина волны 488 нм), широко распространены также красный (642 нм) и фиолетовый (405 нм) лазеры. Для решения специальных задач могут дополнительно устанавливаться лазеры с другими волнами излучения. От «цвета» лазера зависит выбор флуорохромов, которые можно использовать для окраски. Увеличение количества лазеров существенно расширяет этот выбор, позволяет подбирать более эффективные комбинации флуорохромов для характеристики клеток, увеличивать количество параметров клеток, которые можно проанализировать за одно измерение.
В системах с несколькими лазерами свет, полученный при облучении клетки, может собираться для всех лазеров одновременно (коллинеарные системы) или для каждого лазера отдельно (например, при пространственном разделении точек облучения клеток каждым лазером). В последнем случае можно в рамках одного измерения использовать флуорохромы, имеющие сходный спектр эмиссии, если они различаются по спектру возбуждения.
В качестве детекторов светового сигнала от клеток в традиционных проточных цитометрах используются PMT (photomultiplier tube, фотоумножители), которые представляют собой вакуумную лампу с двумя основными электродами (катод и анод) и несколькими промежуточными (диноды). Свет, полученный при облучении клеток, падает на фотоэлектрод PMT и выбивает из него электроны. Эти электроны летят к диноду и каждый из них выбивает еще несколько, которые летят к следующему диноду и т.д. Таким образом, PMT не только преобразует световой сигнал в электрический, но и значительно его усиливает. Благодаря своей чувствительности, PMT до сих остается самым распространенным детектором для проточных цитометров.
Другой вариант детекторов — фотодиоды — все больше набирает популярность с развитием технологии их производства, повышением их чувствительности.
Таким образом, фотоны света преобразуются в электрический импульс, величина которого пропорциональна попавшему на детектор свету. То есть, например, чем больше в клетке окрашенных структур, тем ярче она флуоресцирует, тем сильнее электрический сигнал, регистрируемый на детекторе. Детектор регистрирует весь свет, который на него попадает, поэтому для многоцветного анализа весь спектр, который приходит от клеток необходимо делить на узкие спектральные полоски при помощи серии фильтров, и каждый участок спектра попадает на отдельный детектор, соответствующий определенному «цвету».
В системах, использующих PMT или фотодиоды, анализируется общая интенсивность светового сигнала с каждой клетки, саму клетку, ее форму при этом увидеть невозможно. О том, что точка на графике — это именно исследуемая клетка, приходится догадываться с той или иной степенью вероятности (вместо термина «клетка» принято говорить «событие»). Проблема верификации выделенных популяций «событий» стоит остро и решается дополнительными процедурами анализа, контролями, привлечением клеточного сортинга с последующей микроскопией. Удачным сочетанием наглядности микроскопии и скорости проточной цитометрии стали визуализирующие проточные цитометры (Imaging Flow Cytometers). В качестве детектора в них используется CCD-камера. Хотя чувствительность CCD-матрицы ниже, чем PMT, ее можно значительно усилить. Так, технология TDI (time delay integration, накопление сигнала во времени) предусматривает электронное сопровождение движущихся объектов (клеток). Скорость «перемещения» засвеченных пикселей по матрице синхронизируется со скоростью клетки в потоке, собранные данные по интенсивности изображения на каждом участке матрицы накапливаются и собираются в одно изображение с повышенной яркостью и четкостью. В результате, такие системы обладают чувствительностью, не уступающей и даже превышающей чувствительность PMT. Визуализация любого события обеспечивает верификацию без дополнительных ухищрений и позволяет исследовать популяции, которые в традиционной цитометрии отбрасываются. Каждой точке на графике в визуализирующей проточной цитометрии соответствует изображение, на котором можно проследить не только наличие или отсутствие определенной структуры, но и подсчитать количество этих структур, локализацию в клетке, качественно и количественно оценить морфологию клеток.
По возможности отделить нужную популяцию от остальных клеток проточные цитометры делят на анализаторы (только логическое выделение) и сортеры (логическое и физическое выделение нужных клеток). Клеточные сортеры способны провести анализ, выбрать нужную популяцию и выделить ее в отдельную пробирку, лунку планшета или перенести на предметное стекло. Для разделения клеток большинство сортеров использует электростатическую сепарацию. После прохождения через луч лазера (т.е. после анализа) клетка изолируется в капле жидкости. В зависимости от результатов анализа капля с клеткой получает определенный электрический заряд, благодаря которому она отклоняется в электромагнитном поле и, в итоге, оказывается в пробирке с такими же клетками. Капли, не получившие заряд, попадают в слив и удаляются. В некоторых сортерах сортировка производится при помощи чипов на основе микрофлюидики.
Существуют также другие методы сортировки клеток: при помощи магнитной сепарации (MACS, magnetic-activated cell sorting), при помощи микропузырьков (BACS, buoyancy activated cell sorting), сортировка единичных клеток при помощи микрочипов.
Проточные цитометры придуманы и используются для анализа дискретных частиц: клеток животных и человека, растительных клеток, водорослей, грибов, микроорганизмов. Исследуемые структуры или вещества должны быть расположены на поверхности или внутри этих частиц. Однако существуют также приложения для исследования растворенных веществ — то, чем традиционно занимается ИФА. Для детекции на проточном цитометре растворенных аналитов их нужно связать с частицами, которые сможет «увидеть» проточный цитометр. В качестве таких частиц используют бидсы (beads) — полимерные микросферы, сопоставимые по размеру с клетками (5-15 мкм), с которыми прочно связывают (иммобилизируют) антитела к исследуемому аналиту. В растворе молекулы аналита связываются с нанесенными на бидсы антителами, далее аналит дополнительно метят флуоресцентным красителем (также при помощи антител). По яркости флуоресценции этого красителя судят о концентрации аналита в растворе. Развитие этого метода привело к созданию мультиплексных анализаторов.
По спектру решаемых задач можно разделить проточные цитометры на открытые и закрытые. В открытых системах (большинство проточных цитометров) задачи и способ их решения определяются пользователем и ограничены только возможностями прибора и фантазией исследователя. Закрытые системы ориентированы на решение специализированных задач (одной или нескольких), методы анализа и, зачастую, реагенты определяются производителем этих приборов. Преимущества таких приборов – простота в использовании, минимальная необходимость оптимизации метода, зачастую меньшая цена, чем у открытых систем.
При выборе проточного цитометра стоит обращать внимание на следующие факторы:
какие наиболее типичные измерения, какие цветовые комбинации будут использоваться, какие характеристики прибора должны быть для проведения измерений: количество лазеров, количество флуоресцентных параметров;
тип детекторов флуоресценции (возможность визуализации);
разрешающая способность — способность различать тускло окрашенные популяции;
скорость анализа (актуальна при анализе редких популяций), складывается из возможного количества событий в секунду и скорости потока;
точность измерения, коэффициент вариации (CV) — особенно актуально при анализе клеточного цикла;
минимальный размер анализируемых частиц (актуально для изучения микроорганизмов и микровезикул);
наличие автосэмплера для автоматического анализа из нескольких пробирок или лунок планшета существенно освобождает время исследователя.
Специалист Диаэм по проточной цитометрии и мультиплексному анализу всегда поможет вам с подбором оптимальной модели.
Частично задачи можно решать на других приборах:
подсчет клеток и анализ из жизнеспособности — счетчики клеток;
Проточные цитофлуориметры (цитометры) — высокопроизводительные системы анализа частиц (как правило, клеток) в потоке жидкости. Анализ частиц ведется с большой скоростью (до десятков тысяч в секунду), причем каждая частица анализируется отдельно. Метод проточной цитометрии позволяет получать за короткое время качественные и количественные данные по анализируемым частицам с высокой статистической достоверностью. Проточные цитометры используются для широкого круга задач, связанных с анализом клеток, таких как подсчет клеток, иммунофенотипирование (в иммунологии, гематологии, онкологии, при культивировании клеток и пр.), клеточный цикл и пролиферация, клеточное здоровье и апоптоз, автофагия, клеточный сигналинг, токсикология, эффективность трансфекции и т.д. Типичные объекты — клетки человека и животных, клетки растений и микроводоросли, дрожжи, бактерии, микрочастицы и экзосомы. 
- проточная ячейка с кварцевой кюветой запатентованной конструкции;
