Красители цитологические

Краситель для липидов и гидрофобных сред; хорошая растворимость в органических растворителях; поставляется в виде красно-оранжевых кристаллов.

Условия и срок хранения: 24 месяца при температуре – 20 °С в темноте; транспортировка до трех недель при комнатной температуре.

Бордипиррометеновый флуорофор для визуализации липидных мембран; характеризуется очень высокой яркостью, а также стабильностью в условиях облучения светом возбуждения в конфокальной микроскопии; поставляется в виде оранжевых кристаллов; хорошо растворяется в дихлорметане, этаноле, ацетоне, ДСМО.

Условия и срок хранения: 24 месяца при температуре – 20 °С, в темноте; транспортировка до трех недель при комнатной температуре; беречь от влаги.

Краситель отлично подходит для окрашивания митохондрий, и может служить инструментом для изучения изменения состояния митохондрий и оценки жизнеспособности клеток; поставляется в кристаллическом виде; хорошо растворим в ДСМО и ДМФА; не подходит для протоколов с фиксацией клеток.

Условия и срок хранения: 24 месяца (с момента доставки) при температуре – 20 °С, в темноте; транспортируется до трех недель при комнатной температуре; избегать хранения на свету; беречь от влаги.

Краситель способен проникать в клетки и прокрашивать митохондрии и другие органеллы, но не окрашивает плазматическую мембрану; контрастный краситель для зеленого флуоресцентного белка (GFP); может применяться при фиксации клеток формальдегидом; поставляется в виде 1 мл 5 мМ раствора в ДСМО.

Условия и срок хранения: 24 месяца при температуре – 20 °С в темноте; транспортировка до трех недель при комнатной температуре; беречь от влаги.

Краситель дает яркую зеленую флуоресценцию при связывании с нуклеиновыми кислотами; поставляется в виде 5 мМ раствора в ДСМО; является полным структурным аналогом красителя SYTO13.

Условия и срок хранения: 24 месяца (с момента доставки) при температуре – 20 °С в темноте; транспортировка до трех недель при комнатной температуре; избегать хранения на свету; беречь от влаги.

Флуоресцентный краситель, свободно проникающий через клеточные мембраны без использования дополнительных детергентов и концентрирующийся в органеллах с низким значением pH, например, лизосомах.

Основные характеристики красителя:

• максимум поглощения при 504 нм;
• максимум флуоресценции при 511 нм;
• поставляется в виде 1 мМ раствора в диметилсульфоксиде (ДМСО).

Особенности красителя:

В отличие от 2,4-динитрофенола (ДНФ, DNP), этот краситель не требует использования антител для визуализации органелл. В структуру молекулы LumiTracker Lyso Green входит бордипиррометен (BDP), что придает ей выраженные гидрофобные свойства и обеспечивает хорошую проникающую способность через мембрану клетки. Кроме этого, краситель содержит в своей структуре аминогруппу, которая выступает в роли слабого основания. В нейтральной среде она не полностью протонирована, и молекула красителя остается относительно нейтральной, что способствует лучшему проникновению через клеточную мембрану. Предположительно, попадая в лизосомы с кислой средой, краситель протонируется и таким образом удерживается в составе органеллы с низким значением pH.

Рекомендации по применению красителя:

Мечение живых клеток проводится с использованием наномолярных концентраций LumiTracker Lyso Green, и окрашивание проходит в течение нескольких минут. LumiTracker Lyso Green может влиять на лизосомальный pH, так что более длительная инкубация может вызвать его повышение, поэтому окрашивание рекомендуется проводить в течение 3-7 минут при + 37 °C (в зависимости от клеточной линии и протокола окрашивания) перед визуализацией с использованием флуоресцентной микроскопии. В зависимости от клеточной линии может потребоваться увеличить концентрацию и (или) время окрашивания.

Условия и срок хранения: 12 месяцев (с момента доставки) при − 20 °C в темноте. Транспортировка: до трех недель при комнатной температуре; беречь от влаги; избегать хранения на свету и излишних циклов заморозки-разморозки; при возможности хранить в аликвотах для однократного использования.

Флуоресцентный краситель, свободно проникающий через клеточные мембраны без использования дополнительных детергентов и концентрирующийся в органеллах с низким значением pH, например, лизосомах.

Основные характеристики красителя:

• максимум поглощения при 577 нм;
• максимум флуоресценции при 590 нм;
• поставляется в виде 1 мМ раствора в диметилсульфоксиде (ДМСО);
• рабочая концентрация 50-75 нМ (в зависимости от клеточной линии может потребоваться увеличить концентрацию).

Особенности красителя:

В структуру молекулы LumiTracker Lyso Green входит бордипиррометен (BDP), что придает ей выраженные гидрофобные свойства и обеспечивает хорошую проникающую способность через мембрану клетки. Кроме этого, краситель содержит в своей структуре аминогруппу, которая выступает в роли слабого основания. В нейтральной среде она не полностью протонирована, и молекула красителя остается относительно нейтральной, что способствует лучшему проникновению через клеточную мембрану. Предположительно, попадая в лизосомы с кислой средой, краситель протонируется и таким образом удерживается в составе органеллы с низким значением pH. Проникновение красителя в клетки происходит очень быстро, кроме этого, протонирование красителя способствует локальному защелачиванию, поэтому окрашивание живых клеток рекомендуется проводить не более 7 минут непосредственно перед визуализацией. Возможно фиксировать клетки после окрашивания, однако возрастает уровень неспецифического сигнала.

Рекомендации по применению красителя:

Окрашивание проводится в течение 3-7 минут при + 37 °C в 1x растворе PBS (непосредственно перед визуализацией, отдельным этапом при совместном окрашивании). В зависимости от клеточной линии может потребоваться увеличить концентрацию и (или) время окрашивания.

Условия и срок хранения: 12 месяцев (с момента доставки) при − 20 °C в темноте; транспортировка до трех недель при комнатной температуре; беречь от влаги; избегать хранения на свету и излишних циклов заморозки-разморозки; при возможности хранить в аликвотах для однократного использования.

Краситель НК Hoechst 33258 является популярным ядерным контрастирующим веществом, который испускает синюю/голубую флуоресценцию при связывании с дцДНК. Его использование аналогично Hoechst 33342 (H-1399) для изучения окрашивания, апоптоза и клеточного цикла, но Hoechst 33258, по сообщениям, хуже проникает в клетки. Этот краситель также доступен в растворе (H-3569).

• Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 352 (УФ).
• Длина волны испускания флуоресценции, нм — 461 (зеленый).

Краситель НК Hoechst 33258 является популярным ядерным контрастирующим веществом, который испускает синюю/голубую флуоресценцию при связывании с дцДНК. Его использование аналогично Hoechst 33342 (H-1399) для изучения окрашивания, апоптоза и клеточного цикла, но Hoechst 33258, по сообщениям, хуже проникает в клетки. Этот краситель также доступен в растворе (H-3569).

• Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 352 (УФ).
• Длина волны испускания флуоресценции, нм — 461 (зеленый).

Набор применяется для мечения мембран клеток с целью изучения клеточной миграции и пролиферации клеток. В структуре красителя имеются липофильные группы, позволяющие быстро нековалентно встраиваться в клеточные мембраны широкого спектра клеток, не затрагивая клеточные рецепторы и трансмембранные белки. После окрашивания клетки сохраняют свои способность к пролиферации, что делает РКН26 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Также подходит для изучения мембранных везикул.

Основные характеристики красителя:

• максимум флуоресценции при 567 нм;
• поставляется в виде 1 мМ раствора в изопропаноле;
• стабилен — меченые клетки могут быть исследованы в течении 100 дней после окрашивания.

Состав набора:

• 1 мМ раствор красителя РКН26 в изопропаноле;
• буфер для разведения.

Рекомендации по применению красителя:

набор, содержащий 100 мкл красителя РКН26 (при использовании красителя в конечной концентрации 2 х 10^-6 М) рассчитан на анализ 25 образцов, каждый из которых содержит по 20 миллионов клеток. В зависимости от типов клеток пользователь может самостоятельно экспериментально определить концентрацию красителя. В зависимости от типа клеток и условий эксперимента оптимальные концентрации красителя и клеток могут отличаться, поэтому рекомендуется оценивать жизнеспособность клеток, гомогенность и интенсивность флуоресценции после окрашивания. Не используйте растворы, содержащие азиды, при окрашивании красителем PKH26. Более однородное окрашивание достигается при использовании суспензии клеток.

Условия и срок хранения: 12 месяцев (с момента доставки) при температуре + 4 °С; перед использованием набор необходимо прогреть до температуры + 20 °С.

Набор для оценки пролиферации клеток XTT позволяет количественно измерять количество живых клеток в пробе за 1 этап; анализ результатов с помощью ИФА-фотометра; чувствительность от 5000 клеток на лунку; содержит раствор соли тетразолия XTT (10 х 5 мл) и реагенты для активации (2 х 0.5 мл); рассчитан на 1000 измерений в 96-луночных планшетах; хранение при -20 ⁰С; транспортировка на сухом льду; срок годности - минимум 1 год.

Потребность в надежных, чувствительных и количественных методах анализа, которые позволили бы анализировать большое количество образцов, привела к разработке различных методик, таких как включение радиоактивно-меченого ³Н-тимидина в ДНК или использование 5-бром-2'-дезоксиуридина (BrdU), как замену радиоактивного тимидина для мечения ДНК в живых клетках. Эти методы имеют ряд недостатков, такие как работа с радиоактивными материалами и сложность исполнения. В 1950-х годах исследователи начали использовать соли тетразолия, в том числе МТТ. Данная методика основана на том, что живые клетки преобразуют соли тетразолия в окрашенные соединения формазана. Её биохимические механизмы основаны на активности митохондриальных ферментов, которые инактивируются вскоре после гибели клетки. Этот подход оказался очень эффективным при оценке жизнеспособности клеток. Колориметрический метод с использованием соли тетразолия XTT был впервые описан Scudiero P.A. в 1988 году. Использование XTT приводило к образованию растворимого красителя, в то время как при использовании МТТ образуются нерастворимые соединения формазана, которые необходимо растворять для последующего измерения. Несмотря на то, что МТТ может лучше метаболизироваться многими клеточными линиями, XTT также хорошо восстанавливается клетками в присутствии феназин метасульфата (ФМС). При этом присутствие ФМС не влияет на ход обратной реакции. Использование XTT значительно упрощает протокол и является отличным решением для количественной оценки жизнеспособности клеток без использования радиоактивных изотопов. Данный набор был разработан для анализа изменений в пролиферации клеток в ответ на различные ростовые факторы, цитокины и питательные компоненты. Кроме того, он подходит для измерения цитотоксичности различных веществ, таких как фактор некроза опухолей (ФНО) или других ингибиторов роста. XTT может быть использован как нерадиоактивная замена цитотоксических тестов, основанных на высвобождении ⁵¹Cr из клеток, без потери чувствительности.

Принцип действия

Оценка пролиферации клеток широко используется в клеточной биологии для исследования ростовых факторов, цитокинов или компонентов культуральных сред. Методы оценки пролеферации применяются также в скрининге цитотоксических веществ и исследованиях активации лимфоцитов. Для определения количества жизнеспособных клеток в наборе для оценки пролиферации клеток XTT используется 2,3-бис-(2-метокси-4-нитро-5-сульфофенил)-2H-тетразолий-5-карбоксанилид (XTT). Только в живых клетках митохондрии способны уменьшать количество растворенного XTT с формированием водорастворимого оранжевого красителя. Таким образом, концентрация красителя пропорциональна количеству метаболически активных клеток.

Основные преимущества набора для оценки пролиферации клеток XTT от Applichem

• Безопасность: не используются радиоактивные изотопы;
• точность: интенсивность окрашивания пропорциональна количеству клеток в каждой лунке;
• простота использования: одноэтапный процесс, результаты в течение 2 - 5 ч;
• содержит XTT и реагенты для активации. Дополнительные реактивы или отмывки не требуются;
• анализ результатов в планшетных ИФА-фотометрах: большое количество образцов измеряется одновременно;
• чувствительность: допустима низкая концентрация клеток в лунке (~5000) .

XTT-тест значительно упрощает измерения клеточной пролиферации и жизнеспособности.

Протокол включает культивирование клеток в 96-луночном планшете, добавление XTT-реагента и последующую инкубацию в течение 2 - 24 часов. Во время инкубации (обычно в течение 2 - 5 часов) среда приобретает оранжевый цвет, интенсивность которого может быть измерена с помощью спектрофотометра.
Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству метаболически активных клеток, т.е. чем больше таких клеток в лунке, тем активнее в ней митохондриальные ферменты и тем выше концентрация образовавшегося красителя (краситель растворим в воде и его интенсивность может быть измерена сразу после теста). Использование планшетов и ИФА-анализатора позволяет тестировать большое количество образцов одновременно и сразу получать результаты.

Состав набора

• Раствор XTT (10 x 5мл);
• реагент для активации (2 x 0.5мл), содержащий ФМС (феназин метасульфат)

Оба раствора следует хранить замороженными и не подвергать воздействию света. Чтобы избежать многократного замораживания-оттаивания рекомендуется разделить растворы на аликвоты после первой разморозки.

Замечание: Если в растворе присутствует осадок, нагрейте его до 37°C и размешайте на вортексе до растворения.

Стабильность при хранении

Для оценки стабильности испытания проводились с наборами, выпущенными до 20-ти месяцев назад (с одинаковым лотом 703602) в сравнении с новыми стандартными наборами. На графике показаны образцы, протестированные после 17 и 20 месяцев соответственно. Клетки VERO культивировали в 96-луночных планшетах в течение 24 часов. Затем на клетки воздействовали увеличеной концентрацией BHA в течение 24 ч и их жизнеспособность была измерена с помощью набора для оценки пролиферации клеток XTT.

Красный флюоресцентный краситель, окрашивает ядро и хромосомы, так как не проникает в живые клетки, используется для окрашивания мёртвых клеток в популяции. Применяется для флюоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии, проточной цитометрии и флюорометрии.

Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 535.
Длина волны испускания флуоресценции, нм — 617.

Красный флюоресцентный краситель, окрашивает ядро и хромосомы, так как не проникает в живые клетки, используется для окрашивания мёртвых клеток в популяции. Применяется для флюоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии, проточной цитометрии и флюорометрии.

Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 535.
Длина волны испускания флуоресценции, нм — 617.

Красный флюоресцентный краситель, окрашивает ядро и хромосомы, так как не проникает в живые клетки, используется для окрашивания мёртвых клеток в популяции. Применяется для флюоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии, проточной цитометрии и флюорометрии.

Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 535.
Длина волны испускания флуоресценции, нм — 617.

Классический краситель ДНК.