Вернуться назад

Набор diaGene для выделения плазмидной ДНК из бактерий

Артикул Цена, вал. Наличие на складе Количество
3316.0050 50 выделений 2 500,= RUB 2 500 В наличии
3316.0250 250 выделений 8 700,= RUB 8 700 Под заказ

Описание
Оплата и доставка
Состав набора:

50 выделений

Кат.№ 3316.0050

250 выделений

Кат.№ 3316.0250

Буфер R 12 мл 60 мл
Буфер L 12 мл 60 мл
Буфер N 12 мл 60 мл
Буфер W 8 мл 3 х 15 мл
Буфер E 5 мл 25 мл
РНКаза А 120 мкл 600 мкл
Микроколонки 50 шт 5 х 50 шт
Пробирки для сбора фильтрата 50 шт 5 х 50 шт

Принцип действия

Набор предназначен для выделения до 25 мкг плазмидной ДНК длиной до 20 т.п.н. из 3-5 мл бактериальной культуры. Очистка ДНК на колонках diaGene происходит за счёт избирательного связывания ДНК с сорбентом в присутствии хаотропной соли с последующей отмывкой связанной ДНК от примесей и заканчивается элюцией чистого препарата ДНК.

Выход ДНК зависит от ряда факторов: копийности плазмиды, условий роста, объёма культуры и т.д.

Не рекомендуется использовать для выделения плазмид длиной свыше 50 тысяч пар нуклеотидов, а также для получения препарата плазмидной ДНК для трансфекции эукариотических клеток.

Срок годности и особенности хранения:

  • Все реактивы (кроме РНКазы А) и колонки хранить при комнатной температуре (+15...25 °С).
  • РНКазу А хранить при -20 °С.
  • Буфер R после добавления РНКазы хранить при +2...8°С.
  • После использования пакет с колонками рекомендуется плотно закрывать
  • Срок годности: 12 месяцев с даты изготовления.
  • При транспортировке особые условия не требуются.

Дополнительное оборудование и реагенты:
  • Микроцентрифуга для пробирок типа эппендорф ёмкостью 1,5-2 мл с максимальной скоростью центрифугирования не менее 12500 g;
  • дозаторы переменного объёма и наконечники с фильтрами к ним;
  • стерильные пробирки типа эппендорф ёмкостью 1,5 мл, свободные от нуклеаз;
  • 96 % этанол;
  • деионизованная автоклавированная вода или вода, свободная от нуклеаз.
Выделение плазмидной ДНК из бактерий

Перед началом работы добавьте 8 мл 96 % этанола в Буфер W, а также РНКазу А в Буфер R. При нерегулярном использовании набора рекомендуется отбирать нужное количество Буфера R и добавлять к нему 1/100 объёма РНКазы А. Для перевода значения скорости центрифугирования из об/мин в g воспользуйтесь специальными таблицами.
  1. Осадите бактериальные клетки из 3-5 мл культуры в 1,5 мл пробирке центрифугированием при 1000g в течение 10 минут.
  2. Тщательно ресуспендируйте клетки в 200 мкл Буфера R с РНКазой.
  3. Добавьте 200 мкл Буфера L и осторожно перемешайте. Лизат должен стать прозрачным и вязким. Не перемешивать на вортексе и не встряхивать, так как это может привести к разрыву геномной ДНК и загрязнению конечного препарата.
  4. Добавьте 200 мкл буфера N и тщательно перемешайте до образования белого осадка.
  5. Центрифугируйте 10 минут при 10000 g.
  6. Поместите микроколонку в 2 мл пробирку для сбора фильтрата. Перенесите супернатант в микроколонку и центрифугируйте 1 мин при 12500-13000g.
  7. Вылейте фильтрат, поместите микроколонку в ту же пробирку и нанесите 650 мкл Буфера W. Центрифугируйте 1 мин при 12500-13000g.
  8. Вылейте фильтрат, поместите микроколонку в ту же пробирку и центрифугируйте 1 мин при 13000 об/мин, чтобы удалить остатки Буфера W.
  9. Поместите микроколонку в новую 1,5 мл пробирку. Нанесите в центр мембраны 50-100 мкл Буфера Е и подождите 1 мин. Вместо буфера Е для элюции также можно использовать воду, свободную от нуклеаз, или деионизованную автоклавированную воду. Минимальный объём элюента – 30 мкл, максимальный – 150 мкл. При элюции 30 мкл достигается максимальная концентрация ДНК, при элюции 150 мкл – максимальный выход.
  10. Элюируйте ДНК центрифугированием в течение 1 мин при 12500-13000g.

Возможные проблемы и методы их решения

Проблема

Причина

Решение

Мало ДНК на выходе

Слишком много бактерий

Уменьшить объём культуры. Рекомендуется начинать с 3 мл культуры

Неполный лизис

Ресуспендировать осадок более тщательно до полного разрушения бактериальных сгустков

Неполная нейтрализация после лизиса

Тщательно перемешивать после добавления Буфера N

Перед стадией элюции не полностью удалены остатки Буфера W

Обратить внимание на пункт o дополнительном центрифугировании

Загрязнение геномной ДНК

Слишком интенсивное перемешивание после добавления Буфера N

Перемешивать аккуратно, переворачиванием пробирки

Загрязнение низкомолекулярными примесями (А260/230 < 1,8-2)

Неполная нейтрализация буфером N или примесь осадка в посадке на колонку

«Перерастание» бактериальной культуры

После центрифугирования лизата (п.5) отберите супернатант и центрифугируйте его ещё раз

Подбор оптимальных условий роста (не более 18 часов)

Доставка

Доставка осуществляется по всей России и странам СНГ. Возможен самовывоз со склада по адресу Московская область, г. Мытищи, 7-й Ленинский переулок, д.13. Доставка по Москве и Московской области осуществляется бесплатно.

Цена товара указана со склада в Москве и не включает расходы на доставку в другие города.

Вы можете выбрать способ доставки в личном кабинете, чтобы он автоматически указывался при оформлении всех последующих заказов. При выборе варианта «Транспортная компания по выбору клиента» укажите в комментариях транспортную компанию, с которой вы предпочитаете работать.

Точная стоимость доставки рассчитывается менеджером при подтверждении заказа в зависимости от весообъемных характеристик и дальности. Товары, требующие особого температурного режима, доставляются с соблюдением требуемых условий. Если в заказе есть прекурсоры, необходимо оформить официальное письмо об отпуске прекурсоров. (образец письма об отпуске прекурсоров)


Оплата

Компания Диаэм работает с юридическими и физическими лицами. После оформления заказа продавец-консультант сформирует счет и направит его вам по электронной почте и на страницу заказа в Личном кабинете на сайте. Вы также можете сами сформировать счет из Корзины, авторизовавшись на сайте. Счет оплачивается через банк. Вы можете оплатить товар в кассе Диаэм или любом отделении банка.

Для получения товара необходимо предоставление доверенности организации, а для получения товара при оплате физическим лицом необходим паспорт.

Ваш заказ будет обработан
в ближайшее время.
Мы пришлем уведомление, как только все будет готово. Спасибо!