Обратная транскрипция Выбраны параметры: DiaGene, Россия

Экстра-микс RT-qPCR SYBR Blue предназначен для проведения обратной транскрипции и количественной ПЦР в режиме реального времени одношаговым методом с использованием флуоресцентного красителя SYBR Green I. Кроме собственно экстра-микса RT-qPCR, в состав набора входят 2-кратный буфер RT-qPCR SYBR Blue и вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК). Буфер оптимизирован для протекания как обратной транскрипции, так и ПЦР (в том числе на сложных и GC-богатых матрицах) и содержит все необходимые компоненты (за исключением РНК-матрицы и праймеров), а также интеркалирующий краситель SYBR Green I. Хранение буфера при комнатной температуре в течение 2 дней не снижает эффективность реакции. Инертный краситель в составе Экстра-микса окрашивает его в голубой цвет (максимум поглощения – 615 нм) и облегчает контроль за раскапыванием смеси при использовании многолуночных планшетов.

Экстра-микс RT-qPCR представляет собой смесь обратной транскриптазы MMLV-RH и HS-Taq ДНК-полимеразы с "горячим" стартом в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций.

MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре ниже +70^оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95°С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; обладает способностью присоединять аденин к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

SYBR Green I - флуоресцентный интеркалирующий краситель для количественной и качественной детекции продуктов в ходе ПЦР в режиме реального времени. SYBR Green I обеспечивает простой и экономичный вариант для детекции и количественного определения ПЦР-продуктов без необходимости использования специфичных флуоресцентных зондов (в том числе в режиме реального времени). В ходе амплификации краситель SYBR Green I встраивается в малую бороздку ДНК ПЦР-продуктов и испускает более сильный по сравнению с несвязанным красителем флуоресцентный сигнал. Максимумы поглощения и испускания SYBR Green I - 494 нм и 521 нм соответственно, что позволяет использовать его со всеми известными на сегодняшний день амплификаторами для проведения ПЦР в режиме реального времени.

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	Экстра-микс RT-qPCR	Буфер RT-qPCR SYBR Blue(2x)	ДМСО	Вода, обработанная ДЭПК
1969.0040	40	80 мкл	2 х 0,5 мл	0,5 мл	2 х 0,5 мл
1969.0200	200	2 х 200 мкл	4 х 1,25 мл	0,5 мл	3 х 1,8 мл

Состав Экстра-микса RT-qPCR:

• 50 мM Трис-НCl, рН 8.0 (при +25 °С);
• 100 мM NaCl;
• MMLV-RH обратная транскриптаза;
• HS-Taq ДНК-полимераза;
• 1 мМ ЭДТА;
• 5 мМ дитиотреитол;
• 50% (v/v) глицерин;
• 0,1% (v/v) NP-40.

Состав буфера RT-qPCR SYBR Blue (2х):

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при +25 °С);
• 150 мM КCl;
• 0,6 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 10 мМ MgCl₂;
• 8 мМ дитиотреитол;
• интеркалирующий краситель SYBR Green I;
• инертный краситель;
• стабилизаторы и усилители активности ферментов.

Преимущества использования экстра-микса:

• Высокая специфичность.
• Высокая чувствительность.
• Простота и удобство в использовании.
• Низкая ошибка пипетирования и вероятности кросс-контаминации.
• Стандартизация условий постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Возможность ТА-клонирования ПЦР-продуктов.

Область применения:

• Одношаговая стандартная ОТ-ПЦР.
• Количественный анализ РНК, в том числе анализ экспрессии генов.

Ограничения к использованию:

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.
• Не рекомендуется использовать для ПЦР с флуоресцентными зондами.

Срок хранения и транспортировка:
9 месяцев при -20 °С; не более 30 циклов замораживания- азмораживания экстра-микса RT-qPCR.

Экстра-микс RT-PCR Color предназначен для проведения обратной транскрипции и ПЦР одношаговым методом. Кроме собственно экстра-микса, в состав набора входят 2-кратный буфер RT-PCR Color, ДМСО и вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК). Буфер оптимизирован для протекания как обратной транскрипции, так и ПЦР и содержит все необходимые компоненты (за исключением РНК-матрицы и праймеров). Хранение буфера при комнатной температуре в течение 2 дней не снижает эффективность реакции. Буфер содержит красители, не влияющие на работу ферментов, и компоненты, увеличивающие плотность пробы для удобства нанесения на гель.

Экстра-микс RT-PCR Color представляет собой смесь обратной транскриптазы MMLV-RH и HS-Taq ДНК-полимеразы с "горячим" стартом в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций.

MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре ниже +70^оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95°С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; обладает способностью присоединять аденин к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	Экстра-микс RT-PCR Color	Буфер RT-PCR Color (2x)	ДМСО	Вода, обработанная ДЭПК
1971.0040	40	80 мкл	2 х 0,5 мл	0,5 мл	2 х 0,5 мл
1971.0200	200	2 х 200 мкл	4 х 1,25 мл	0,5 мл	3 х 1,8 мл

Состав Экстра-микса RT-qPCR:

• 50 мM Трис-НCl, рН 8.0 (при +25 °С);
• 100 мM NaCl;
• MMLV-RH обратная транскриптаза;
• HS-Taq ДНК-полимераза;
• 1 мМ ЭДТА;
• 5 мМ дитиотреитол;
• 50% (v/v) глицерин;
• 0,1% (v/v) NP-40.

Состав буфера RT-qPCR (2х):

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при +25 °С);
• 150 мM КCl;
• 0,6 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 6 мМ MgCl₂;
• 8 мМ дитиотреитол;
• стабилизаторы и усилители активности ферментов;
• маркерные красители.

Преимущества использования экстра-микса:

• Высокая специфичность.
• Высокая чувствительность.
• Простота и удобство в использовании.
• Низкая ошибка пипетирования и вероятности кросс-контаминации.
• Стандартизация условий постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Возможность ТА-клонирования ПЦР-продуктов.
• Сокращается стадия пробоподготовки для анализа результатов ПЦР - благодаря утяжеляющим добавкам и красителям, не требуется буфер для нанесения пробы на гель.

Область применения:

• Одношаговая стандартная ОТ-ПЦР.
• Анализ экспрессии генов.

Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.

Срок хранения и транспортировка:
9 месяцев при -20 °С; не более 30 циклов замораживания-размораживания экстра-микса RT-qPCR.

Стерильная вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК), свободная от РНКаз и ДНКаз, предназначена для работы c ДНК и РНК, приготовления растворов для молекулярно-биологических работ, проведения различных молекулярно-биологических реакций.

Условия хранения: комнатная температура.

Ингибитор РНКаз RiBond ингибирует рибонуклеазную активность эукариотических ферментов, таких как РНКаза A, РНКаза B, РНКаза C, и защищает РНК от неспецифического гидролиза. Представляет собой рекомбинантный белок массой 50 кДа, экспрессируемый в E.coli, предназначен для использования в приложениях, где присутствие РНКаз может снизить качество результатов экспериментов, например при выделении РНК, синтезе кДНК, ОТ-ПЦР, транскрипции и трансляции in vitro.

Условия хранения: -20 °С.

Реагент RiSave для стабилизации и хранения РНК в образцах крови или костного мозга для последующего анализа предназначен для стабилизации и хранения внутриклеточной мРНК из периферической крови или костного мозга, что актуально в случаях транспортировки, либо при длительном хранении биоматериала для последующего выполнения молекулярно-генетических исследований. Реагент содержит в своем составе вещества, стабилизирующие мРНК, что обеспечивает максимально близкие по отношению к нативному биоматериалу значения экспрессии исследуемых генов.

Особенности реагента RiSave

Реагент RiSave имеет следующие особенности:

• стабилизирует РНК в образцах крови или костного мозга;
• незаменим при анализе экспрессии генов;
• пригоден для длительного хранения образцов без деградации РНК;
• совместим с реагентом RiZol для последующего выделения РНК;
• хранение и использование при комнатной температуре.

Рекомендации по условиям хранения и транспортировки образцов крови и костного мозга с использованием реагента для стабилизации РНК:

• комнатная температура (от 18 до 25 °С) — 3 суток;
• хранение в холодильнике (от 2 до 8 °С) — 5 суток;
• заморозка (от -20 до -70 °С) — до 8 лет.

Условия хранения: 18-25 °C.

Шприц-пробирки RiTube предназначены для стабилизации и хранения внутриклеточной мРНК из периферической крови или костного мозга, для транспортировки, или длительного хранения биоматериала для последующего выполнения молекулярно-генетических исследований. Реагент содержит в своем составе вещества, стабилизирующие мРНК, что при последующих исследованиях обеспечивает максимально близкие по отношению к значениям экспрессии исследуемых генов в нативном биоматериале.

Шприц-пробирки RiTube с биообразцами следует хранить в вертикальном положении. В случае долгосрочного хранения образцов в холодильнике при температуре 2 – 8 °C или в морозильной камере (-20 °C) требуется предварительная экспозиция при комнатной температуре (но не выше 25 °С) не менее 4 часов. При глубокой заморозке при температуре -80 °C, образцы следует предварительно заморозить при -20 °C в течении 24 часов, после чего можно перенести замороженные образцы на хранение при температуре -80 °C.

Рекомендации по хранению биообразцов периферической крови в шприц-пробирках:

• 4 – 72 часа при 18–25 °C;
• 4 – 120 часов при 2–8 °C;
  
• 4 часов — 6 месяцев при -20 °C.

Условия хранения: 18 – 25 °C.

Экстра-микс для ОТ-кПЦР Real-RT-PCR (5x) – это готовая к использованию 5-кратная смесь предназначенная для анализа молекул РНК с помощью одностадийной ОТ-ПЦР. Экстра-микс Real-RT-PCR (5x) содержит смесь RTaq ДНК-полимеразы с горячим стартом, термостабильной обратной транскриптазы Smart RTT, dATP, dCTP, dGTP, dTTP и оптимизированного буферного раствора, содержащего MgCl2. Обратная транскриптаза Smart RTT обладает термостабильностью, отсутствием активности РНКазы Н и позволяет работать с РНК имеющей сложную вторичную структуру, синтезируя более протяженную кДНК, увеличивает специфичность и количество получаемой ДНК. Для проведения реакции ОТ-ПЦР в экстра-микс необходимо добавить РНК-матрицу, праймеры и при необходимости флуоресцентно-меченные зонды или интеркалирующий краситель. Оптимально подобранное соотношение ферментов и буферного раствора позволяют проводить мультиплексный анализ в одной пробирке.

Основные характеристики экстра-микса для ОТ-кПЦР Real-RT-PCR (5x)

• Простое и удобное проведение одностадийной ОТ-ПЦР;
• проведение обратной транскрипции по матрице РНК имеющей сложную вторичную структуру;
• пониженный риск контаминации за счет сокращения манипуляций при подготовке реакции;
• возможность проведения мультиплексной реакции в одной пробирке;
• удобство использования при анализе большого количества образцов.

Применение экстра-микса для ОТ-кПЦР Real-RT-PCR (5x)

• Одностадийная ОТ-ПЦР в реальном времени;
• мультиплексная одностадийная ОТ-ПЦР в реальном времени;
• анализ экспрессии генов;
• получение ПЦР-продуктов с возможностью клонирования в Т-вектора.

Комплект поставки экстра-микс для ОТ-кПЦР Real-RT-PCR (5x).

Условия хранения: -20 °С.