Носители для белковой (FPLC) хроматографии российского производства

Компания Диаэм предлагает аффинные и ионобменные носители для белковой хроматографии российского производства.

Хроматографы низкого давления используются для препаративного выделения рекомбинантных белков, антител и их фрагментов, а также отработки разных методик разделения и очистки биологических молекул с целью последующего масштабирования этих процедур на производстве. Хроматографию низкого давления обычно проводят в стеклянных или пластиковых хроматографических колонках или картриджах, заполненных иммобилизованными аффинными, гидрофобными или ионно-обменными сорбентами.

Афинные носители

Аффинные носители представляют собой агарозный носитель, химически модифицированный различными функциональными группами. В основе принципа his-tag хроматографической очистки белков (она же металл-хелатная аффинная хроматография (МХХ) лежит взаимодействие между ионами металлов и имидазольным кольцом гистидина.

Полигистидиновая метка (Poly-his-tag или просто His-tag) является самой популярной меткой, используемой в аффинной хроматографии белков. Из-за своего небольшого размера (6 повторяющихся аминокислотных остатков) метка практически не меняет функции белка, а низкая иммуногенность и универсальность делает метку практически уникальной.

В настоящее время для аффиной хроматографии существуют продукты, основанные на двух различных лигандах-хелаторах:

1) Лиганд нового поколения AZUR с повышенной устойчивостью к ЭДТА – аналог лиганда используемого в сорбенте Cytiva Ni Sepharose excel и колонках HisTrap excel.

2) Традиционный лиганд NTA – нитрилотриуксусная кислота.

Кроме того, при необходимости возможно изготовление под заказ носителя с различными связанными ионами помимо традиционного Ni: Металл, с которым связан лиганд в хелатном комплексе может заметно влиять на аффинность и специфичность МХХ. Обычно действует следующее правило: чем выше выход белка, тем менее специфично его выделение. Обычно, по увеличению специфичности (и, соответственно, уменьшению аффинности), ионы располагаются в следующей последовательности: Cu²⁺, Ni²⁺, Zn²⁺, Co²⁺.

В данный момент доступны к заказу два варианта носителей.

Носитель AbiFlow 100 Ni-AZUR Agarose

Носитель AbiFlow 100 Ni-AZUR Agarose – разработка для очистки белков методом металл-хелатной хроматографии низкого давления. Носитель представляет собой микросферы со средним диметром 100 мкм, полученные путем кросс-сшивания природного полисахарида агарозы фармакопейного качества, с иммобилизованным комплексом тетра-дентантного хелатирующего лиганда с никелем (AZUR-Ni). Предназначен для реализации металл-хелатной хроматографии в FPLC, спин- и батч- форматах. Размер микросфер влияет на скорость потока и выход белка.

Носитель выдерживает самые высокие концентрации хелаторов, таких как ЭДТА и ДТТ, которые обычно используются в буферах для клеточных культур млекопитающих (вплоть до 20 мМ ДДТ и ЭДТА). Лиганд сопоставим с тем, который используется в Cytiva Ni Sepharose excel. Обращаем Ваше внимание, что носитель на основе AZUR не может быть регенерирован по стандартному протоколу с использованием ЭДТА.

* Микросферы с более узким диапазоном и другими средними размерами поставляются по договоренности.

Носитель AbiFlow 100 Ni-NTA Agarose

Носитель AbiFlow 100 Ni-NTA Agarose – классический тип носителя для металл-хелатной хроматографии (МХХ) белков. Представляет собой микросферы средним диаметром около 100 мкм на основе кросс-сшитой агарозы фармакопейного качества с иммобилизованным комплексом лиганда нитрилотриуксусной кислоты с никелем (NTA-Ni). Предназначен для реализации МХХ в FPLC, спин- и батч- форматах.

* Микросферы с более узким диапазоном и другими средними размерами поставляются по договоренности.

Информация для заказа:

Ионобменные носители

Принцип работы ионообменной хроматографии (ИОХ или IEX) основан на разделении белков с разным поверхностным зарядом, что обеспечивает высокое разрешение сепарации и емкость загрузки образца. Разделение основано на обратимом электростатическом взаимодействии между заряженным белком и противоположно заряженной хроматографическим носителем. Вследствие высокой скорости кинетики связывания, для ионообменной хроматографии можно использовать высокие скорости потока и носители различной степени твердости. Кроме того, за счет регулирования рН-буфера и, тем самым, изменяя заряд макромолекул, можно легко управлять эффективностью их разделения.

Носитель AbiFlow 100 СМ-Agarose

Носитель AbiFlow 100 СМ-Agarose — слабый катионобменник на основе кросс-сшитой 4% агарозы фармакопейного качества и иммобилизованных на нее карбоксиметильных (СМ) остатков – слабого ионообменного лиганда. Отлично подходит для быстрой и эффективной очистки белков методом ион-обменной хроматографии, которую проводят, как правило, в растворах с низкой ионной силой, а элюцию связавшихся белковых молекул – в возрастающем солевом градиенте.

Носитель имеет высокую пористость, что обеспечивает эффективное ионное взаимодействие с белками. Сшитая агароза физически стабильна, что делает ее пригодной для процессов очистки при низком давлении со скоростью потока до 5 мл/мин (оптимально 0,5–2 мл/мин).

Плотность иммобилизованных СМ групп превышает 30 мкмоль/мл. AbiFlow 100 DEAE-Agarose поставляется в виде 50% суспензии, т.е. 1 мл соответствует 500 мкл влажной смолы. Суспензия содержит 20% этанола в качестве консерванта.

AbiFlow 100 СМ-Agarose стабильна в диапазоне pH 2–14, что упрощает разработку процедуры «очистки на месте» (CIP).

* Микросферы с более узким диапазоном и другими средними размерами поставляются по договоренности.

Информация для заказа: