История
История
|
Инкубатор гибридизационный используется для проведения гибридизации проб ДНК и РНК с нуклеиновой кислотой на фильтровальной бумаге (Саузерн-блоттинг (Southern blot) и Нозерн-блоттинг (Northern blot)) и для инкубации блотированных белков с антителами (Вестерн-блоттинг (Western blot)). Принцип работы инкубатора гибридизационного основывается на поддержании постоянной температуры с высокой точностью и гарантированной однородностью по всему объему при непрерывном мягком перемешивании компонентов реакции, что обеспечивает равномерное распределение раствора по мембране фильтра. Гибридизация нуклеиновых кислот — соединение комплементарных одноцепочечных молекул нуклеиновых кислот в одну двухцепочечную молекулу. Гибридизация нуклеиновых кислот подразделяется на:
Перенос ДНК / РНК с геля на нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр производится в буферном растворе. За счет капиллярного эффекта создается ток буфера, перпендикулярный плоскости геля. Вымываемая из геля ДНК / РНК задерживается фильтром и практически полностью оказывается на его поверхности. После переноса фрагменты ДНКа / РНКа фиксируются на фильтре. Расположение фрагментов на фильтре точно соответствует их расположению в геле. Для того чтобы визуально выявить нужные фрагменты, проводят гибридизацию со специфическим меченым зондом. Нуклеотидная последовательность зонда должна быть полностью или частично комплементарна изучаемому участку геномной ДНК / РНК. При инкубации в гибридизационном инкубаторе фильтра с раствором, содержащим меченый зонд, происходит гибридизация комплементарных цепей ДНК РНК зонда и фрагмента на фильтре. Неспецифические связанные молекулы зонда отмываются с помощью специальной процедуры. Радиоактивно меченные участки выявляют путем экспонирования фильтра с рентгеновской пленкой (авторадиография). После проявления на пленке видны полосы меченной зондом ДНК/РНК. |
|
|
С помощью личного кабинета Вы сможете:
Сравнение
