Сортер клеток S3e, Bio-Rad. Обзор

Сортер клеток S3e от Bio-Rad — это инновационная система сортинга с классической системой гидродинамической фокусировки, предназначенная для решения научно-прикладных задач в области сортировки клеток, в зависимости от сигнала флуоресцентной метки. В приборе реализована инновационная технология ProDrop.

В проточном цитометре, оборудованном системой для сортировки клеток, проточная ячейка закреплена на пьезокристалле. При подаче на него напряжения кристалл вместе с ячейкой совершает колебания с заданной частотой, в результате чего струя жидкости с клетками разбивается на отдельные капли. Проходя сквозь заряжающее кольцо, капля может приобретать положительный или отрицательный заряд в зависимости от того, какая клетка содержится внутри капли. Пролетая мимо отклоняющих пластин, капля с клеткой притягивается к ним, выходит из основного потока и попадает в пробирку. Суть технологии ProDrop заключается в том, что после прохождения процедуры детекции и сортинга калибровочных частиц ProLine, несортированные частицы подвергаются вторичной детекции на выходе, что позволяет оценить, насколько успешно прошла процедура сортировки, и в автоматическом режиме внести коррекцию процедуры без вмешательства пользователя.

Технические характеристики сортера клеток S3e

• Уровень чувствительности, событий/сек — до 100000;
• частота сортировки, событий/сек — до 30000;
• точность сортировки, % — более 99;
• диаметр сопла, мкм — 100;
• направление сортировки — 2-х линейное;
• источник света — до 3 лазеров на выбор из 4 доступных (405, 488, 561, 640 нм);
• детекция в 4-х флуоресцентных каналах (525/30, 586/25, 615/25, 655 нм);
• чувствительность менее <125 MESF для красителей FITC и PE;
• сортировка до 5 пробирок по 5 мл каждого направления селекции,
• возможность сортировки в стрипованные пробирки и на предметные стекла
• для микроскопии;
• минимальное разрешение — 0,5 мкм;
• система охлаждения Пельтье, температурный диапазон, °C — от 4 до 37;
• габариты, ШхГхВ, см — 70×65×65.

Комплект поставки: сортер клеток S3e, лазерs 488 и 561 нм, 4 флуоресцентных детектора, калибровочный набор, контейнеры (2 шт.) для реагентов и отходов, соединительные трубки, ПО ProSort, кабель, ПК.

Примеры использования сортера клеток S3e, Bio-Rad

Видео 5 минут: Investigating Cancer Stem Cells with the S3e Cell Sorter

Лекция 50 минут: Advanced Topics in Cell Sorting

Видео 5 минут: Identifying Predictive Biomarkers for Successful Immunotherapy Treatments.

Find out how the S3e Cell Sorter can help scientists discover new biomarkers that have the potential to become new therapies for cancer and other diseases.

Статьи с использованием сортера клеток S3e, Bio-Rad

1. Exosome mediated miR-155 delivery confers cisplatin chemoresistance in oral cancer cells via epithelial-mesenchymal transition Prathibha Kirave, Piyush Gondaliya1, Bhagyashri Kulkarni1, Rakesh Rawal, Rachana Garg, Alok Jain and Kiran Kalia

Естественный груз для миРНК это эксосомы, которые облегчают межклеточную коммуникацию в микросреде опухоли. Нарушение регуляции miRNA обычное явление при раке, и играет важную роль в устойчивости к химиотерапии. Опосредованный экзосомами перенос miRNA может играть важную роль устойчивости к лекарственным препаратам и служить мишенью для терапии рака. В изучению эксосомов, miRNA, сортер клеток S3e, Bio-Rad имеет критическую роль в данном случае для определения клеточного цикла. doi: 10.18632/oncotarget.27531

2. Strong increase in the autofluorescence of cells signals struggle for survival. Jérémy Surre

Прокариотические и эукариотические клетки обладают собственной естественной флуоресценцией из-за присутствия флуоресцентных клеточных структурных компонентов и метаболитов. Клеточная аутофлуоресценция (AF) зависит от метаболического состояния клеток. В данной статье было изучено воздействие различных стрессоров на изменение аутофлуоресценции клеток Escherichia coli. Спектры возбуждения и испускания, а также повышенная экспрессия генов биосинтеза флавинов убедительно свидетельствуют о том, что флавины вносят основной вклад увеличению аутофлуоресценции.

Повышенная экспрессия генов, кодирующих различные флавопротеины, указывает на клеточную стратегию борьбы с тяжелыми стрессами. Наблюдаемое усиление аутофлуоресценции при стрессе – это эволюционно законсервированное явление, поскольку оно происходит не только в клетках разных видов бактерий, но также в клетках дрожжей и человека. Влияние ампициллина на прямое рассеяние света и интенсивность автофлуоресценции клеток E. coli, а так же клеточное выживание, определялось сортером клеток S3e, Bio-Rad. doi: 10.1038/s41598-018-30623-2

3. Purification of high-quality RNA from a small number of fluorescence activated cell sorted zebrafish cells for RNA sequencing purposes Siebe Loontiens, Lisa Depestel, Suzanne Vanhauwaert, Givani Dewyn, Charlotte Gistelinck, Karen Verboom, Wouter Van Loocke, Filip Matthijssens, Andy Willaert, Jo Vandesompele, Frank Speleman & Kaat Durinck

Контроль транскрипции зависит от активности комплексов факторов транскрипции, метилирования ДНК, динамики модификации хроматина, а также образования петель ДНК более высокого порядка. На перестройку транскрипционных сетей во время развития рака большое влияние оказывают генетические поражения и эпигенетические изменения. Секвенирование РНК в настоящее время служит золотым стандартом для подробной и объективной молекулярной характеристики модельных систем как in vitro, так и in vivo.

В последние годы zebrafish (Danio rerio) становится все более важной в качестве модельного организма. Эмбриональное развитие у рыбок данио происходит быстро. Разработка линий флуоресцентных репортеров рыбок Danio rerio, в которых флуоресцентный маркер управляется промотором (специфичным для определенного типа клеток), делает возможным выполнение сортировки флуоресценцией клеток – сортер клеток S3e, Bio-Rad. Таким образом можно определять клеточное - специфические транскриптом, которые могли бы быть замаскированы при анализе РНК, полученной из целого эмбриона. Сортировка большого количества клеток (> 1 миллиона) не всегда возможна при работе с флуоресцентными репортерными эмбрионами. В зависимости от выбранного промотора флуоресцентный маркер может экспрессироваться только в небольшом количестве клеток и, таким образом, приводит к низкому выходу РНК. Учитывая важность получения достаточного количества высококачественной РНК для исследований экспрессии, было оптимизировано извлечение РНК из отсортированных с помощью – сортер клеток S3e, Bio-Rad – клеток эмбрионов рыбок данио и провелена углублення оценка качества извлеченной РНК. doi: 10.1186/s12864-019-5608-2