Иммуноблоттинг: реагенты, электрофорез, перенос, обработка, визуализация

Краситель для белкового фореза InstantBlue Coomassie Protein Stain:

• готовый к употреблению краситель Кумасси для полиакриламидных гелей;
• окраска 15 минут без фонового окрашивания;
• без фиксации, отмывок, УЗ обработки и т.п.;
• высокая чувствительность — выявляются полоски с 5 нг белка;
• высокое отношение сигнал/шум;
• гели не перекрашиваются даже после длительного нахождения в красителе;
• расход, мл/гель — 25;
• нетоксичный: не содержит метанол и уксусную кислоту;
• подходит для масс-спектрометрии: белки не метилируются и не ацетилируются, краситель можно отмыть стандартными способами.

Маркеры белковые цветные предокрашенные Prism Ultra (10 - 175 кДа), Abcam, 500 мкл. Содержат 11 белковых стандартов, три из которых (10, 40, 90 кДа) ковалентно связаны с голубым хромофором. Характеризуются четкими полосами на геле. Протестированы для белкового денатурирующего электрофореза в полиакриламидном геле (SDS-PAGE Tris-glicine) и вестерн-блоттинга (WB) на мембранах из PVDF, нейлона и нитроцеллюлозы. Готовы к использованию и не требуют нагрева, разведения и добавления восстанавливающего агента. Буфер содержит: 0,44% Трис-цитрата/фосфата, 2% натрий додецилсульфата (SDS), 0,01% бета-меркаптоэтанола, 0,02% мочевины, 15% глицерина. Условия хранения: -20 °С, стабильны до 3 месяцев при 4 °С, до 24 месяцев при -20 °С. Рекомендуется наносить 5 – 10 мкл на дорожку геля для SDS-PAGE или 2,5 – 5 мкл на дороджку геля для WB Стандарты: 10, 14, 22, 29, 42, 51, 62, 70, 95, 130, 175 кДа

Маркеры белковые трехцветные предокрашенные Prism Ultra (10 - 180 кДа), Abcam, 500 мкл. Содержат 10 белковых стандартов, ковалентно связанных с голубым хромофором, за исключением двух белков с молекулярным весом 28 кДа (зеленый) и 75 кДа (красный). Характеризуются четкими полосами на геле. Протестированы для белкового денатурирующего электрофореза в полиакриламидном геле (SDS-PAGE Tris-glicine) и вестерн-блоттинга (WB) ) на мембранах из PVDF, нейлона и нитроцеллюлозы. Готовы к использованию и не требуют нагрева, разведения и добавления восстанавливающего агента. Буфер содержит: 0,44% Трис-цитрата/фосфата, 2% натрий додецилсульфата (SDS), 0,22% дитиотрейтола (DTT), 0,02% мочевины, 15% глицерина. Условия хранения: -20 °С, стабильны до 3 месяцев при 4 °С, до 2 недель при +25 °С Рекомендуется наносить 1,5 – 2,5 мкл на дорожку Стандарты: 10, 17, 28, 35, 48, 63, 75, 100, 130, 180 кДа

Маркеры белковые трехцветные предокрашенные Prism Ultra (3,5 - 245 кДа), Abcam, 500 мкл. Содержат 13 белковых стандартов, ковалентно связанных с голубым хромофором, за исключением двух белков с молекулярным весом 25 кДа (зеленый) и 75 кДа (красный). Характеризуются четкими полосами на геле. Протестированы для белкового денатурирующего электрофореза в полиакриламидном геле (SDS-PAGE Tris-glicine) и вестерн-блоттинга (WB) на мембранах из PVDF, нейлона и нитроцеллюлозы. Готовы к использованию и не требуют нагрева, разведения и добавления восстанавливающего агента. Буфер содержит 0,44% Трис-цитрата/фосфата, 2% натрий додецилсульфата (SDS), 0,22% дитиотрейтола (DTT), 0,02% мочевины, 15% глицерина. Условия хранения: -20 °С, стабильны до 3 месяцев при 4 °С Рекомендуется наносить 1,5 – 2,5 мкл на дорожку Стандарты: 3,5, 11, 17, 20, 25, 35, 48, 63, 75, 100, 135, 180, 245 кДа

ab116028 Маркеры белковые трехцветные предокрашенные Prism Ultra, 10-245 кДа, 50 мкл, Abcam

Cодержат 12 белковых стандартов, ковалентно связанных с голубым хромофором, за исключением двух белков с молекулярным весом 25 кДа (зеленый) и 75 кДа (красный).
Характеризуются четкими полосами на геле.
Протестированы для белкового денатурирующего электрофореза в полиакриламидном геле (SDS-PAGE Tris-glicine) и вестерн-блоттинга (WB) на мембранах из PVDF, нейлона и нитроцеллюлозы.
Готовы к использованию.
Состав буфера:
• трис-цитрата/фосфат - 0,44%
• натрий додецилсульфат (SDS) - 2%
• дитиотрейтол (DTT) - 0,22%
• мочевина - 0,02%
• гицерин - 15%
Условия хранения: -20 °С, стабильны до 3 месяцев при 4 °С
Рекомендуется наносить - 1,5 – 2,5 мкл на дорожку.
Стандарты: 10, 17, 20, 25, 35, 48, 63, 75, 100, 135, 180, 245 кДа.

Наборы ECL представляют собой хемилюминисцентный субстрат, специально разработанный как для работы с фотопленками, так и для работы с хемидокументирующими системами.

• Позволяют получать сигнал с очень низким фоном, повышает чувствительность.
• Обеспечивают длительный срок свечения хемилюминисцентного комплекса для длительной или повторной детекции мембран.
  

Наборы ECL представляют собой хемилюминисцентный субстрат, специально разработанный как для работы с фотопленками, так и для работы с хемидокументирующими системами.

• Позволяют получать сигнал с очень низким фоном, повышает чувствительность.
• Обеспечивают длительный срок свечения хемилюминисцентного комплекса для длительной или повторной детекции мембран.
  

Наборы ECL представляют собой хемилюминисцентный субстрат, специально разработанный как для работы с фотопленками, так и для работы с хемидокументирующими системами.

• Позволяют получать сигнал с очень низким фоном, повышает чувствительность.
• Обеспечивают длительный срок свечения хемилюминисцентного комплекса для длительной или повторной детекции мембран.
  

Система Power Blotter XL разработана для полусухого метода переноса фракций белков с геля на мембрану при проведении вестерн-блоттинга.

Характеристики системы Power Blotter XL, Thermo FS:

• метод переноса — электроблоттинг;
• эффективный комбинированный протокол переноса, перенос белков с молекулярной массой от 10 до 300 кДа;
• площадь блоттинга, см — 8,0×13,5;
• объем буфера, мл — 200-400;
• время блоттинга, мин — 5-10;
• одна кассета для блоттинга;
• перенос до 4-х гелей мини формата за 1 запуск;
• может использоваться со стандартными расходными материалами для «полусухого» переноса (мембраны, бумага, буферы), возможность работы с готовыми гелями;
• встроенный источник питания;
• встроенные протоколы переноса для белков с разной молекулярной массой и до 25 протоколов, настраиваемых пользователем;
• ЖК-дисплей с подсветкой;
• сенсорная панель управления.

Комплект поставки: система Power Blotter XL, 1 кассета, ролик для удаления пузырьков, набор расходных материалов.

.

Система Pierce Power Blotter разработана для полусухого метода переноса фракций белков с геля на мембрану при проведении вестерн-блоттинга.

• Метод переноса — электроблоттинг;
• эффективный комбинированный протокол переноса, перенос белков с молекулярной массой от 10 до 300 кДа;
• площадь блоттинга, см — 8,0×13,5;
• объем буфера, мл — 200-400;
• время блоттинга, мин — 5-10;
• одна кассета для блоттинга;
• перенос до 4-х гелей мини формата за 1 запуск;
• может использоваться со стандартными расходными материалами для «полусухого» переноса (мембраны, бумага, буферы), возможность работы с готовыми гелями;
• встроенный источник питания;
• встроенные протоколы переноса для белков с разной молекулярной массой и до 25 протоколов, настраиваемых пользователем;
• ЖК-дисплей с подсветкой;
• сенсорная панель управления.

Комплект поставки: система Pierce Power Blotter, 1 кассета, ролик для удаления пузырьков, набор расходных материалов.

Система для блоттинга Pierce Power Blotter, Thermo, брошюра, англ., 4 стр.

.

В отличие от обычного полусухого переноса, где основным механизмом движения реагентов является диффузия, в системе SNAP i.d.2.0 используется вакуум для активного переноса реагентов на мембрану.

Система применима для проведения вестерн-блоттинга, ускоряя стадии блокировки мембраны, инкубации с антителами и промывки:

• площадь блоттинга, мм — 75 х 84 (мини) / 87 х 135 (миди);
• совместима с нитроцеллюлозными и PVDF-мембранами и всеми распространенными реагентами для блоттинга (флуоресцентными, хемилюминесцентными, хромогенными);
• возможно работать независимо с 2 гелями;
• уменьшает время инкубации с антителами до 10 мин, суммарное время блокировки, инкубации с антителами и промывки до 30 мин;
• снижает уровень фонового сигнала, т.к. излишки реагентов удаляются под действием вакуума;
• эффективная блокировка мембраны с использованием низких концентраций блокирующего агента (0,05–0,5% обезжиренного сухого молока NFDM) исключает риск переблокировки;
• чувствительность такая же или лучше, чем при традиционной технике иммунодетекции;
• воспроизводимость условий блоттинга и получаемых результатов;
• коллектор для сбора первичных антител для повторного использования;
• совместима с вакуумным насосом, вакуум 410 мбар, 34 л/мин, например, WP6222050, Millipore (опция);
• габариты, Д х В х Г, cм — 40,6 х 8,8 х 32,4.

Для защиты вакуумного насоса от контаминации рекомендуется использовать колбу Бунзена на 1 л (опция) и фильтрующую насадку SLFA05010, Millipore (опция), как показано на схеме выше.

В отличие от обычного полусухого переноса, где основным механизмом движения реагентов является диффузия, в системе SNAP i.d.2.0 используется вакуум для активного переноса реагентов на мембрану.

Система применима для проведения вестерн-блоттинга, ускоряя стадии блокировки мембраны, инкубации с антителами и промывки:

• площадь блоттинга, мм — 75 х 84 (мини) / 87 х 135 (миди);
• совместима с нитроцеллюлозными и PVDF-мембранами и всеми распространенными реагентами для блоттинга (флуоресцентными, хемилюминесцентными, хромогенными);
• возможно работать независимо с 2 гелями;
• уменьшает время инкубации с антителами до 10 мин, суммарное время блокировки, инкубации с антителами и промывки до 30 мин;
• снижает уровень фонового сигнала, т.к. излишки реагентов удаляются под действием вакуума;
• эффективная блокировка мембраны с использованием низких концентраций блокирующего агента (0,05–0,5% обезжиренного сухого молока NFDM) исключает риск переблокировки;
• чувствительность такая же или лучше, чем при традиционной технике иммунодетекции;
• воспроизводимость условий блоттинга и получаемых результатов;
• коллектор для сбора первичных антител для повторного использования;
• совместима с вакуумным насосом, вакуум 410 мбар, 34 л/мин, например, WP6222050, Millipore (опция);
• габариты, Д х В х Г, cм — 40,6 х 8,8 х 32,4.

Для защиты вакуумного насоса от контаминации рекомендуется использовать колбу Бунзена на 1 л (опция) и фильтрующую насадку SLFA05010, Millipore (опция), как показано на схеме выше.

В отличие от обычного полусухого переноса, где основным механизмом движения реагентов является диффузия, в системе SNAP i.d.2.0 используется вакуум для активного переноса реагентов на мембрану.

Система применима для проведения вестерн-блоттинга, ускоряя стадии блокировки мембраны, инкубации с антителами и промывки:

• площадь блоттинга, мм — 75 х 84 (мини) / 87 х 135 (миди);
• совместима с нитроцеллюлозными и PVDF-мембранами и всеми распространенными реагентами для блоттинга (флуоресцентными, хемилюминесцентными, хромогенными);
• возможно работать независимо с 2 гелями;
• уменьшает время инкубации с антителами до 10 мин, суммарное время блокировки, инкубации с антителами и промывки до 30 мин;
• снижает уровень фонового сигнала, т.к. излишки реагентов удаляются под действием вакуума;
• эффективная блокировка мембраны с использованием низких концентраций блокирующего агента (0,05–0,5% обезжиренного сухого молока NFDM) исключает риск переблокировки;
• чувствительность такая же или лучше, чем при традиционной технике иммунодетекции;
• воспроизводимость условий блоттинга и получаемых результатов;
• коллектор для сбора первичных антител для повторного использования;
• совместима с вакуумным насосом, вакуум 410 мбар, 34 л/мин, например, WP6222050, Millipore (опция);
• габариты, Д х В х Г, cм — 40,6 х 8,8 х 32,4.

Для защиты вакуумного насоса от контаминации рекомендуется использовать колбу Бунзена на 1 л (опция) и фильтрующую насадку SLFA05010, Millipore (опция), как показано на схеме выше.

Fusion FX гель- и хемидокументирующие полностью автоматические системы — изображение в один клик. Ультрачувствительная камера исследовательского уровня с уникальным светосильным объективом с фокусным расстоянием f 0,84 обеспечивает непревзойденную чувствительность — от 1 пг белка. Системы Fusion FX позволяют получать исключительного качества изображения высокой точности и резкости (Clarity technology), с очень низким уровнем шума (HRS technology).

Fusion FX7 идеальны для хемилюминисценции. Высокое разрешение камеры 4,2 Мп и охлаждение -42°С позволяют использовать эту систему для задач хемилюминесценции, флуоресценции, биолюминесценции, мультиплексных задач (опция — капсулы Spectra UV, NIR, IR, RGB), а также документировать in vivo (опция — терморегулируемый столик).

Fusion-FX7.Edge:

• разрешение камеры DARQ-7, Мп — 4,6;
• разрешение изображения, Мп — 10;
• охлаждение камеры, °С — −65;
• линзы V0.70 с фокусным расстоянием f 0,70;
• поле зрения, см — 22×22;
• монохромное и цветное изображение;
• 7-ми позиционный моторизованный фильтродержатель;
• LED-источник белого света;
• автоматическое управление светом;
• автоматическая фокусировка;
• автоматическое определение положения образца в камере из 4 позиций с помощью IR сенсора;
• система лазеров для лучшего позиционирования образца;
• «темные комнаты» изготовлены из металла: устойчивы, надежны, удобны, компактны;
• надежная дверная защелка, совмещенная с системой выключения УФ при открывании дверцы;
• управление требует наличия компьютера;
• ПО Fusion-Capt — библиотека применений AppsStudio, 3D-изображение;
• универсальные сменные трансиллюминаторы Pad видимого и УФ-света, SuperBright, Skylight (опция);
  капсулы Spectra (опция);
• габариты, Ш×Г×В, мм — 115×66×96;
• вес брутто, кг — 75.

Система комплектуется ПО Fusion-Capt для оценки, презентации и повышения качества изображений (формат изображения — TIFF, BMP, JPEG). ПК в комплект поставки не входит:

• подсчет молекулярного веса и размеров фрагментов после электрофореза (задание числа полос, распознавание полос, задание молекулярных масс маркеров, количественный подсчет);
• подсчет числа колоний и их характеристик (автоматически или вручную);
• анализ изображения — подвижность RF (задание числа полос, распознавание полос, задание RF (длина пробега);
• редактирование изображения (добавление комментариев, символов, даты, поворот, изменение контрастности и яркости).

Применяются для визуализации и сохранения результатов работы с образцами ДНК (красители: этидиум бромид, SYBR Green, SYBR Gold, Texas Red, Gel Star), с образцами белков (красители: кумасси голубой, SyproRuby, SyproOrange, SyproRed, Silver Star, Fluorescein, Fluorescein, Qdot), с хемилюминесцентными образцами (ECL, ECL Plus, ECL Advance, ECL Plex, CDP Star, Qdot, Super Signal, CSPD).
Узнать больше о системах Fusion FX на сайте производителя.

Fusion FX гель- и хемидокументирующие полностью автоматические системы — изображение в один клик. Ультрачувствительная камера исследовательского уровня с уникальным светосильным объективом с фокусным расстоянием f 0,70 обеспечивает непревзойденную чувствительность — от 1 пг белка. Системы Fusion FX позволяют получать исключительного качества изображения высокой точности и резкости (Clarity technology), с очень низким уровнем шума (HRS technology).

Fusion FX6 идеальны для УФ-флуоресценции. Высокое разрешение камеры 6,3 Мп и охлаждение -30°С позволяют использовать эту систему для задач хемилюминесценции, биолюминесценции, мультиплексных задач (опция — капсулы Spectra UV, NIR, IR, RGB), а также документировать in vivo (опция — терморегулируемый столик).
Fusion-FX6.Edge:

• Разрешение камеры EVO-6, Мп — 6,3;
• разрешение изображения, Мп — 20;
• охлаждение камеры, °С — −30 (−55 °С от комнатной);
• линзы V0.70 с фокусным расстоянием f 0,70;
• поле зрения, см — 24×20;
• 7-ми позиционный моторизованный фильтродержатель;
• LED-источник белого света;
• автоматическое управление светом;
• автоматическая фокусировка;
• автоматическое определение положения образца в камере из 4 позиций с помощью IR сенсора;
• система лазеров для лучшего позиционирования образца;
• «темные комнаты» изготовлены из металла: устойчивы, надежны, удобны, компактны;
• надежная дверная защелка, совмещенная с системой выключения УФ при открывании дверцы;
• управление требует наличия компьютера;
• ПО Evolution-Capt — библиотека применений AppsStudio, 3D-изображение;
• универсальные сменные трансиллюминаторы-Pad видимого и УФ-света, SuperBright, Skylight (опция);
• капсулы Spectra (опция);
• габариты, Ш×Г×В, мм — 115×66×96;
• вес брутто, кг — 75.

Установка трансиллюминатора Pad в PadBox:



Система комплектуется ПО Evolution-Capt для оценки, презентации и повышения качества изображений (формат изображения — TIFF, BMP, JPEG). ПК в комплект поставки не входит:

• подсчет молекулярного веса и размеров фрагментов после электрофореза (задание числа полос, распознавание полос, задание молекулярных масс маркеров, количественный подсчет);
• подсчет числа колоний и их характеристик (автоматически или вручную);
• анализ изображения — подвижность RF (задание числа полос, распознавание полос, задание RF (длина пробега);
• редактирование изображения (добавление комментариев, символов, даты, поворот, изменение контрастности и яркости).

Применяются для визуализации и сохранения результатов работы с образцами ДНК (красители: этидиум бромид, SYBR Green, SYBR Gold, Texas Red, Gel Star), с образцами белков (красители: кумасси голубой, SyproRuby, SyproOrange, SyproRed, Silver Star, Fluorescein, Fluorescein, Qdot), с хемилюминесцентными образцами (ECL, ECL Plus, ECL Advance, ECL Plex, CDP Star, Qdot, Super Signal, CSPD).
Узнать больше о системах Fusion FX на сайте производителя.