Набор для многоцветного флуоресцентного окрашивания с 6 метками и 7 цветами TSAPLus, Servicebio, Китай

Набор TSAPlus (6 меток, 7 цветов) предназначена для проведения высокоспецифичного многоцветного иммунофлуоресцентного окрашивания гистологических препаратов в парафиновых срезах. Набор позволяет осуществлять мультиплексную детекцию как для первичных антител, полученных от одного вида-продуцента, так и для антител из различных источников.

Функционирование системы базируется на методе амплификации тирамидного сигнала (TSA). В основе данной технологии лежит каталитическая реакция: под воздействием пероксидазы хрена (HRP) и пероксида водорода (H₂O₂) активированный тирамид, сопряженный с флуорофором, формирует устойчивые ковалентные связи с тирозиновыми остатками белков в непосредственной близости от эпитопа. Процесс обеспечивает локальное накопление высокой концентрации флуорофора в зонах формирования комплекса «антиген-антитело», что гарантирует существенное усиление интенсивности сигнала.

Спектральный диапазон набора обеспечивается набором тирамин-меченых красителей: iF440, iF488, iF546, iF594, iF647 и iF700. Данные реагенты характеризуются высокой эффективностью и фото-стабильностью, что позволяет проводить последовательные циклы иммуноокрашивания без потери качества визуализации и достигать многоцветного окрашивания.

Допускается модификация протокола путем интеграции дополнительных флуоресцентных меток, соответствующих оптическим характеристикам используемой системы детекции (микроскопа). Для верификации совместимости сторонних красителей и оптимизации конфигурации системы рекомендуется консультация со специалистами технической поддержки производителя.

Технические характеристики набора

• Количество тестов — 50;
• срок хранения набора составляет 12 месяцев при соблюдении соответствующих условий;
• срок годности готового раствора — 24 часа.

Ниже приведены данные флуоресцентного спектра красителей, входящих в состав наборов для флуоресцентного окрашивания серии TSA

Компоненты набора и условия хранения:

• iF440-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF488-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF594-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF647-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF700-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
  
• разбавитель для тирамида — 100 мл, хранить при +2-8 °C;
• DAPI (готовый к использованию) — 10 мл, хранить при +2-8 °C;
• подавитель автоматической флуоресценции (Sudan Black B) — 10 мл, хранить при комнатной температуре;
• антифлуоресцентный закрепитель — 5 мл, хранить при -20 °C;
• инструкция, шт. — 1.

Протокол использования:

• Подготовка перед экспериментом:
• подготовьте раствор для восстановления антигена (рекомендуется использовать цитратный буфер pH 6,0 или Tris-EDTA буфер pH 8,0/9,0);
• подготовьте PBS-буфер, TBST-буфер, 3% H₂O₂ и 0,3% H₂O₂;
• подготовьте сыворотки для блокирования (рекомендуется бычий сывороточный альбумин (BSA), нормальная сыворотка осла, кролика или козы);
  
• подготовьте первичные антитела и соответствующие вторичные антитела, меченные HRP.
  
• Приготовление рабочего раствора TSA:
• смешайте компоненты согласно списку:

Способ применения: рабочий раствор TSA рекомендуется готовить непосредственно перед применением. Хранить его следует при +4 °C в защищенном от света месте, срок годности раствора — 24 часа.