Набор для многоцветного флуоресцентного окрашивания с 5 метками и 6 цветами TSAPLus, Servicebio, Китай

Набор для многоцветного флуоресцентного окрашивания TSAPlus дает возможность проводить иммунофлуоресцентное окрашивание парафиновых срезов, используя 5 меток и 6 цветов. Он особенно удобен, если нужно пометить несколько первичных антител единого происхождения, но также может применяться и с антителами, полученными из различных источников.

Принцип действия базируется на методике TSA (Tyramide Signal Amplification). Суть метода заключается в пероксидазной реакции тирамида: флуоресцентно-меченый тирамид создает прочные ковалентные связи с тирозиновыми остатками белков антигена и окружающего матрикса под воздействием HRP и H₂O₂. Это приводит к заметному усилению сигнала за счет накопления значительного количества флуорофора в месте связывания антигена с антителом.

В комплекте поставляются тирамин-меченые красители iF440, iF488, iF546, iF594 и iF647. Они обеспечивают яркую и стабильную флуоресценцию, что позволяет повторять процедуру иммуноокрашивания несколько раз для получения многоцветного изображения.

Лаборанты могут комбинировать эти красители с другими подходящими флуоресцентными соединениями. Выбор зависит от источника света, установленного в системе визуализации. Чтобы уточнить совместимость красителей, рекомендуется связаться с технической поддержкой производителя.

Технические характеристики набора

• Количество тестов — 50;
• срок хранения набора составляет 12 месяцев при соблюдении соответствующих условий;
• срок годности готового раствора — 24 часа.

Ниже приведены данные флуоресцентного спектра красителей, входящих в состав наборов для флуоресцентного окрашивания серии TSA

Компоненты набора и условия хранения:

• iF440-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF488-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF546-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF594-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• iF647-Tyramide — 25 мкл, хранить при -20 °C;
• разбавитель для тирамида — 100 мл, хранить при +2-8 °C;
• DAPI (готовый к использованию) — 10 мл, хранить при +2-8 °C;
• подавитель автоматической флуоресценции (Sudan Black B) — 10 мл, хранить при комнатной температуре;
• антифейд-монтажная среда — 5 мл, хранить при -20 °C;
• инструкция, шт. — 1.

Протокол использования:

• Подготовка перед экспериментом:
• подготовьте раствор для восстановления антигена (рекомендуется использовать цитратный буфер pH 6,0 или Tris-EDTA буфер pH 8,0/9,0);
• подготовьте PBS-буфер, TBST-буфер, 3% H₂O₂ и 0,3% H₂O₂;
• подготовьте сыворотки для блокирования (рекомендуется бычий сывороточный альбумин (BSA), нормальная сыворотка осла, кролика или козы);
  
• подготовьте первичные антитела и соответствующие вторичные антитела, меченные HRP.
  
• Приготовление рабочего раствора TSA:
• cмешайте компоненты согласно таблице ниже:

Примечание: рабочий раствор TSA рекомендуется готовить непосредственно перед применением. Хранить его при +4 °C в защищенном от света месте, срок годности раствора — 24 часа.