	50 выделений	250 выделений
	Кат.№ 3361.0050	Кат.№ 3361.0250
Лизис-буфер LBB	5 мл	25 мл
Раствор для сорбции	14 мл	70 мл
Раствор для промывки 1	40 мл	2 х 100 мл
Раствор для промывки 2 (концентрат)	18 мл	3 х 30 мл
Протеиназа К	2 мг	5 x 2 мг
Микроколонки	50 шт.	250 шт.
2 мл пробирки для сбора фильтрата	50 шт.	250 шт.

Методика рассчитана на выделение ДНК из 100 мкл цельной крови, стабилизированной ЭДТА. Объём образца может варьировать от 50 до 200 мкл. При этом объёмы Буфера LBB, Протеиназы К и Раствора для сорбции должны быть изменены пропорционально.

Дополнительное оборудование и реагенты:

твердотельный термостат, желательно с функцией перемешивания;
микроцентрифуга для пробирок типа эппендорф ёмкостью 1,5-2 мл с максимальной скоростью центрифугирования не менее 13000 об/мин;
дозаторы переменного объёма и наконечники с фильтрами к ним;
стерильные пробирки типа эппендорф ёмкостью 1,5 мл, свободные от нуклеаз;
96% этанол;
буфер PBS (для выделения ДНК из лейкоцитарного осадка);
деионизованная автоклавированная вода или вода, свободная от нуклеаз.

Перед началом работы:

добавьте 96% этанол в Раствор для промывки 2 (42 мл для 50 выделений, 70 мл в каждый флакон для 250 выделений) и тщательно перемешайте;
растворите Протеиназу К в деионизованной воде (2 мг в 110 мкл, 10 мг в 520 мкл). Рекомендуется расфасовать раствор Протеиназы К на аликвоты по 20-50 мкл;
возможно выпадение осадка в Растворе для сорбции. Для растворения осадка перед использованием необходимо прогреть раствор в течение 5-10 минут при +55 ^°С. Не нагревать свыше +65 ^°С!
во избежание загрязнения образцов не рекомендуется сливать фильтрат через край. Для удаления фильтрата используйте автоматическую пипетку или аспиратор;
для перевода значения скорости центрифугирования из об/мин в g воспользуйтесь специальными таблицами.

Выделение геномной ДНК из цельной крови

К 100 мкл образца добавьте 100 мкл Лизис-буфера LBB, тщательно перемешайте.
Добавьте 2 мкл раствора Протеиназы К, тщательно перемешайте и инкубируйте в термостате с перемешивание при 350-400 об/мин при +56 ^°С 30 минут. Если термостат без перемешивания - периодически встряхивайте пробирки.
Добавьте 280 мкл Раствора для сорбции и перемешайте на вортексе.
Внесите в колонку 100 мкл Раствора для промывки 1 (это не обязательно, но повышает эффективность сорбции) и выделяемый образец (не более 550 мкл). Центрифугируйте 2 минуты при 10000g. Необходимо учитывать, что объём колонки составляет 650 мкл. Если объём образца превышает 650 мкл, последовательно нанести образец на колонку, удаляя каждый раз фильтрат из пробирки для сбора фильтрата.
Нанесите на фильтр колонки 300 мкл Раствора для промывки 1 и центрифугируйте 2 минуты при 10000g. Удалите фильтрат.
Повторите п. 5.
Нанесите на фильтр колонки 500 мкл Раствора для промывки 2 и центрифугируйте 1 минуту при 12500-13000g.. Удалите фильтрат.
Повторите п. 7.
Поместите микроколонку в ту же пробирку и центрифугируйте 1 минуту при 12500-13000g для удаления остатков раствора.
Поместите микроколонку в новую 1,5 мл пробирку. Нанесите в центр мембраны 50 мкл деионизованной воды и подождите 1-3 минуты. Минимальный объём воды для элюции — 30 мкл, максимальный — 100 мкл. При элюции 30 мкл достигается максимальная концентрация ДНК, при элюции 100 мкл — максимальный выход.
Элюируйте ДНК центрифугированием в течение 1 мин при 12500-13000g. В среднем из 100 мкл человеческой крови выделяется от 0,5 до 2 мкг геномной ДНК. Ёмкость колонки составляет до 20 мкг ДНК. Для получения большего количества геномной ДНК рекомендуется выделение из лейкоцитарного осадка.

Выделение геномной ДНК из лейкоцитов

Заморозьте образцы при -20 °С для лизиса эритроцитов.
После оттаивания центрифугируйте образцы при 1500 g в течение 10 минут.
Удалите супернатант, по возможности не затрагивая осадок.
Ресуспендируйте осадок в 200 мкл буфера PBS. Добавьте 200 мкл Буфера LBB и 8 мкл Раствора протеиназы К. Инкубируйте образцы при +56 °С в течение 30 минут в термостате с перемешиванием либо периодически встряхивая пробирки.
Добавьте к образцам 560 мкл Раствора для сорбции, перемешайте на вортексе.
Внесите в колонку 600 мкл выделяемого образца. Центрифугируйте 3 минуты при 10000 g. Необходимо учитывать, что объём колонки составляет 650 мкл. Удалите фильтрат и внесите в колонку оставшуюся часть образца. Центрифугируйте 3 минуты при 10000 g. Удалите фильтрат. Если выделение производится из осадка с объёма крови более 500 мкл — то лизат может быть вязким и плохо фильтрующимся. В этом случае увеличьте время центрифугирования до 5 минут. Дальнейшее выделение ДНК производится по методике для цельной крови, описанной выше, начиная с п.5.

Особенности хранения и срок годности:

Все реактивы (кроме протеиназы К) и колонки хранить при комнатной температуре (+15...25 °С);
протеиназу К хранить при +2...8 °С, после растворения — при -20 °С;
после использования пакет с колонками рекомендуется плотно закрывать;
срок годности: 12 месяцев с даты изготовления;
при транспортировке особые условия не требуются.

Доставка

Доставка осуществляется по всей России и странам СНГ. Возможен самовывоз со склада по адресу Московская область, г. Мытищи, 7-й Ленинский переулок, д.13. Доставка по Москве и Московской области осуществляется бесплатно.

Цена товара указана со склада в Москве и не включает расходы на доставку в другие города.

Вы можете выбрать способ доставки в личном кабинете, чтобы он автоматически указывался при оформлении всех последующих заказов. При выборе варианта «Транспортная компания по выбору клиента» укажите в комментариях транспортную компанию, с которой вы предпочитаете работать.

Точная стоимость доставки рассчитывается менеджером при подтверждении заказа в зависимости от весообъемных характеристик и дальности. Товары, требующие особого температурного режима, доставляются с соблюдением требуемых условий. Если в заказе есть прекурсоры, необходимо оформить официальное письмо об отпуске прекурсоров. (образец письма об отпуске прекурсоров)

Оплата

Компания Диаэм работает с юридическими и физическими лицами. После оформления заказа продавец-консультант сформирует счет и направит его вам по электронной почте и на страницу заказа в Личном кабинете на сайте. Вы также можете сами сформировать счет из Корзины, авторизовавшись на сайте. Счет оплачивается через банк. Вы можете оплатить товар в кассе Диаэм или любом отделении банка.

Для получения товара необходимо предоставление доверенности организации, а для получения товара при оплате физическим лицом необходим паспорт.