Экстра-микс для ПЦР HS-Taq PCR-Color

Экстра-микс HS-Taq Color представляет собой 2-кратную реакционную смесь, содержащую все компоненты, необходимые для проведения ПЦР (исключая ДНК-матрицу и праймеры):

• высокопроцессивную рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу с "горячим" стартом;
• смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов;
• ПЦР-буфер;
• Mg^2+;
• красители.

Экстра-микс оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР c “горячим” стартом; он химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристик плавления матрицы. В его состав входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР.

Увеличивающие плотность пробы компоненты и красители позволяют наносить реакционную смесь сразу на гель после амплификации для удобства работы с ней.
Форма реагентов для проведения ПЦР в виде экстра-микса экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования.
HS-Taq ДНК-полимераза, входящая в состав экстра-микса, неактивна при температуре ниже +70^оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95 °С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; она обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

Кроме экстра-микса, в состав набора также включены 50 мМ MgCl₂ и стерильная вода. Входящий в набор раствор MgCl₂ позволяет легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему "матрица-праймеры".

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	HS-Taq Color (2х)	50 мМ MgCl2	Вода
1961.0200	200	4 х 1.25 мл	1 х 1 мл	4 х 1.25 мл
1961.1020	1020	17 х 1.5 мл	2 х 1.8 мл

Состав экстра-микса HS-Taq Color (2х):

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С);
• 100 мM KCl;
• 0,4 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 4 мМ MgCl₂;
• 0,06 ед. акт./мкл HS-Taq ДНК-полимеразы;
• 0,2% Tween 20;
• стабилизаторы HS-Taq ДНК-полимеразы;
• красители.

Преимущества использования экстра-микса HS-Taq Color с Taq-полимеразой с "горячим" стартом:

• Фермент с “горячим” стартом повышает специфичность, чувствительность и выход реакции.
• Для активации HS-Taq ДНК-полимеразы требуется не более 5 мин.
• Сокращается время на подготовку реакции.
• Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР.
• Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Возможно использование в широком спектре видов ПЦР.
• Возможность ТА клонирования продуктов ПЦР за счет выступающих на концах амплифицированных фрагментов ДНК дезоксиаденозиновых остатков.
• Удобство нанесения проб на гель после амплификации благодаря высокой плотности смеси и наличию красителя

Область применения:

• ПЦР с “горячим” стартом.
• Высокопроизводительная ПЦР.
• Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
• Наработка ПЦР-продуктов для ТА клонирования.
• ОТ-ПЦР.

Ограничения к использованию:

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 т.п.о.
• Из-за содержания красителя не рекомендуется использовать для ПЦР в режиме реального времени и других приложений, требующих измерения оптической плотности или флуоресценции пробы. Для таких приложений рекомендуется использовать смеси HS-qPCR или HS-qPCR SYBR Blue.

Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Срок хранения и транспортировка:
1 год при -20 °С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

1961_Экстра-микс для ПЦР HS-Taq Color, инструкция, Диаэм, русск., 6 стр.