Мультиплексный анализ

Многие процессы, исследуемые с помощью иммунологических методов (например, воспаление), являются динамичными и многокомпонентными. Мультиплексный анализ позволяет определять десятки и сотни аналитов одновременно в небольшом объеме образца.

Преимущества мультиплексного анализа по сравнению с классическими методами детекции и определения концентрации аналитов, такими как ELISA (ИФА):
  • одновременное определение множества аналитов (до 500) в одной лунке планшета;
  • небольшое количество образца – менее 50 мкл;
  • высокая чувствительность, широкий диапазон концентраций – 1-10 000 пг/мл;
  • быстрые, воспроизводимые результаты.

В основе технологии мультиплексного анализа — использование полимерных микросфер диаметром 5-6 мкм, несущих на поверхности зонды к определенным молекулам. Микросферы содержат два флуорофора в различных концентрациях, соотношение которых позволяет создавать разные спектральные характеристики у разных микросфер. Иными словами, у каждого типа микросфер есть свой спектральный адрес, который распознается мультиплексным анализатором.
beads.jpg

Каждый тип частиц с известными спектральными характеристиками несет уникальный вид зонда, например, моноклональные антитела против детектируемого аналита. При добавлении микросфер молекулы аналита связываются антителами. Далее связанный аналит выявляется путем добавления детектирующих антител, конъюгированных с биотином. Биотин связывается с флуоресцентной меткой при добавлении меченного флуорохромом (фикоэритрином) стрептавидина. В результате получается сложный комплекс "микросфера-аналит-флуорохром", который анализируется мультиплексным анализатором.

При классическом мультиплексном анализе такие комплексы анализируются методами проточной цитометрии: при облучении красным и зеленым лазерами в проточной ячейке. По спектральному адресу микросферы определяется тип анализируемого аналита, по яркости флуоресценции метки — его концентрация.

Описанная технология может дополнительно усложняться, например, включением третьей краски для маркировки микросферы. Анализ относительной интенсивности флуоресценции трех флуорофоров позволяет различить до 500 разных типов микросфер, то есть определять до 500 разных аналитов в одном образце.

Помимо методов проточной цитометрии для детекции микросфер может применяться анализ изображений, полученных CCD-камерой. Для этого используются микросферы, которые, помимо флуоресценции, обладают также магнитными свойствами. Комплексы "микросфера-аналит-флуорохром" примагничиваются в зоне фокуса CCD-камеры, которая регистрирует изображения флуоресценции микросфер при облучении зеленым и красным светом.

Технологии мультиплексного анализа применяются для анализа как белков, так и нуклеиновых кислот в исследованиях цитокинов / хемокинов, клеточного сигналинга, медиаторов воспаления, онкомаркеров, кардиомаркеров, инфекционных заболеваний, факторов транскрипции, апоптоза, рецепторов гормонов, нейромаркеров, экспрессии генов, SNP-генотипировании, микро-РНК и др.

Частично задачи можно решать на других приборах: ИФА-анализаторах, проточных цитометрах.

При работе с мультиплексным анализатором может понадобиться дополнительное оборудование: автоматические пипетки, микро- и миницентрифуги, вортексы, шейкеры для планшетов, планшетные промыватели, магнитные сепараторы.

xMap-appl.jpg
Plex_diag.jpg luminex-magpix.jpg

Все производители

Другое лабораторное оборудование и принадлежности: автоклав лабораторный, автоматическая пипетка, анализатор со2, вытяжной шкаф для лаборатории.